湖州申科生物致力于提供符合嚴格法規要求的宿主細胞蛋白（HCP）ELISA檢測試劑盒。為確保產品滿足生物制品（如抗體藥、疫苗）申報（如IND/BLA）的監管標準，申科構建了全流程依規開發的質量體系：整個開發過程嚴格遵循ISO 13485質量標準，并滿足用戶審計要求。其開發流程明確包含三個關鍵階段：①HCP殘留定量檢測參考品開發：關鍵在于建立可靠的HCP抗原參考品，涵蓋抗原的表征、量值溯源與賦值、均一性和穩定性考察等，確保檢測的準確性與代表性。②高質量大批量抗體制備：通過優化的HCP抗原動物免疫策略，結合嚴謹的抗體質量標準（如建立標準、覆蓋率驗證）和穩定的制備工藝，生產具有高特異性和廣覆蓋度的檢測抗體，保證檢測的特異性和靈敏度。③檢測體系開發及驗證：進行嚴謹的檢測體系開發與驗證工作，其驗證方案符合ICH指導原則及藥典關于分析方法驗證的標準要求。同時，嚴格執行物料質控，并在潔凈車間環境中進行生產，確保試劑盒方法的穩健性、重現性與法規符合性。這一從抗原源頭到成品體系的標準化、合規化開發流程，是湖州申科HCP檢測產品品質與可靠性的根本保障。

磷脂酶B樣蛋白2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），因其強共純化能力、強免疫原性和潛在的酶活性，被認為是CHO HCP的關鍵高風險因子之一。目前行業建議，需要開發特定的檢測方法對這些已知蛋白或特定蛋白進行監控以更好地把控其潛在風險。SHENTEK^® CHO PLBL-2殘留檢測試劑盒（酶聯免疫吸附法）是湖州申科生物自主研發的、具有完全自主知識產權的CHO PLBL-2蛋白通用檢測試劑盒。本試劑盒適用于基于CHO表達系統的生物制品中CHO HCP高風險蛋白PLBL-2的定量檢測。本試劑盒操作步驟少，快速，檢測專一性強，性能穩定可靠。

宿主細胞蛋白通常是與重要細胞功能相關的蛋白，如細胞增殖、基因轉錄、蛋白合成修飾、細胞存活、細胞凋亡等，在工藝過程中分泌或因細胞死亡或裂解而釋放。生產過程中，以下幾個因素會主要影響HCP的組成和豐度：①宿主細胞基因組調控及培養工藝：特定工藝下，潛在的HCP數量可能非常大，且非所有基因都表達，某些基因在不同的時間和條件下表達；如大腸桿菌約4300個基因，不同的工藝產物會經歷獨特的翻譯后修飾，增加了HCP的總數和生化復雜性。有研究表明，如大腸桿菌表達的蛋白，其不同蛋白之間存在數量差異，這些差異可能是對環境條件的適應性反應，但大多數 (85-90%) 有潛在免疫原性的宿主細胞蛋白在不同的發酵過程中都會出現。②產物表達方式：宿主細胞與外源基因、載體和輔助成分組成的體系可以穩定、瞬時和誘導表達；如大腸桿菌常見的表達形式有胞內表達、分泌表達、可溶性表達、不溶性的包涵體形式，以及融合和非融合表達。③純化步驟及產品本身的特性的影響：純化過程中大部分的HCP被去除(>99％)，殘留的HCP仍保留在產品中，可能與產品共結合，一起被純化。

宿主細胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估實驗操作復雜，需要在建立實驗方法階段對關鍵步驟進行充分的驗證，以證明實驗方法的穩健性。湖州申科開發的基于磁珠捕獲的IMBS方法（immunomagnetic beads separation），在開發過程中對關鍵步驟進行了充分驗證,相關結果經過專業評審，驗證的內容如下（部分）：①方法優化：針對磁珠與抗體的偶聯比例、洗滌液體積、洗滌次數、洗脫次數等關鍵參數進行優化驗證，以保證方法的穩健性；②過程質控：二維電泳存在實驗步驟多，時間跨度長，中間步驟難以控制等缺陷，因此在等電聚焦實驗部分設計了熒光標記多肽，可快速判斷等電聚焦效果。在SDS-PAGE電泳的兩側增加40 ng銀染質控，用于銀染顯色的控制；③方法重復性：針對2D分析以及LC-MS分析進行重復性確認，其中2D分析方法重復性可達到80%以上，LC-MS分析方法可到90%以上；④上樣量優化：針對2D分析以及LC-MS分析進行上樣量確認，消除上樣量差異對檢測結果帶來的影響；⑤假陽性：排除樣品與陰性抗體之間是否存在非特異性結合，確定IMBS實驗所設定的步驟、參數是否有假陽性結果存在。

中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是抗體、重組蛋白、疫苗等生物制品生產中普遍使用的動物細胞表達系統。在使用CHO宿主生產過程中，不可避免的會引入宿主細胞蛋白（HCP）雜質，即使較低殘留水平下，HCPs也會存在免疫原性，降低產品蛋白穩定性等的風險。因此需對生物制品中殘留的HCP進行定量分析，以保證純化工藝的一致性和終產品的安全性。SHENTEK^®CHO HCP檢測試劑盒實現關鍵試劑全國產化，采用CHO 細胞（K1&S）補料分批培養工藝制備HCPs 免疫綿羊，獲得專門的抗體，用于CHO細胞系表達的生物制品(單抗，重組蛋白，疫苗等)中宿主細胞蛋白的殘留檢測。本試劑盒操作步驟少、快速、檢測專一性強、性能穩定可靠。

湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內容，依托公司深耕生物制品質量控制領域十余年經驗，針對LC-MS檢測HCPs方法進行了評價與優化。同時通過對LC-MS檢測HCPs整體流程建立完整的質控，建立起一套抗干擾能力強、穩定性好、準確度高、結果真實可靠的LC-MS檢測HCPs標準方法。檢測技術平臺分成樣品制備、質譜檢測、數據生信分析及質譜結果方法驗證四部分，已使用LC-MS平臺進行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細胞HCPs抗體覆蓋率的檢測分析。