影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的因素之一是樣品質量。HCP檢測貫穿生物制品生產的全過程，涉及收獲、純化、制備等多個步驟。在不同樣品基質下，HCP檢測可能存在巨大差異。例如，對于含有佐劑的疫苗，由于佐劑的干擾，難以在成品中對HCP項目進行檢測，因此一般在吸附工藝之前的原液階段進行檢測。此外樣品的收集、處理和保存方式對檢測結果至關重要。不正確的處理可能導致蛋白降解或變性，從而影響檢測結果。例如，若采用歷史批樣品作為內部質控品，應結合其穩定性數據合理制定保存條件及保存期限，以保證檢測方法的準確性和穩定性。

LC-MS技術作為生物制品宿主細胞蛋白殘留檢測新趨勢，需考慮以下幾點：①穩定性：需要HCPs LC-MS檢測流程進行驗證，全流程都需要有嚴格的QC控制，確保檢測結果的一致性和穩定性。②可重復性：不同類型生物制品中HCPs提取效率不同，不同人員操作存在差異，需要在上機前通過不同方法評估HCPs的提取效率，避免人為因素造成結果重復性差。③準確度：方法開發與驗證階段，通過設立內標與定量算法，根據內標響應回算得到HCPs的含量，確保定量結果的準確性。④抗干擾能力：高豐度蛋白和特殊基質會對質譜檢測產生影響，需要通過前處理手段對高豐度蛋白或特殊的基質進行去除，以減少其對HCPs肽段在質譜檢測時的影響。⑤真實性：樣品中除HCPs以外的物質在質譜分析中同樣會產生質譜信號，需要去除復雜的背景噪音避免假陽性和假陰性的出現，建立合理標準的生信分析流程。分析流程建立過程中同樣需要建立嚴格的質控QC標準，并通過后期不同方法進行驗證，確定其標準的真實性。

針對宿主細胞蛋白殘留檢測，工藝特異型檢測試劑盒（upstream-process）專為特定生產工藝設計，其關鍵在于使用產物的實際宿主細胞進行開發與驗證，模擬真實生產流程獲取廣譜HCP抗原，并要求抗血清具備高度覆蓋率以適應工藝變動，確保對特定生產流程殘留的高度準確監控。平臺型檢測試劑盒（platform）則由生產商針對其特定表達宿主細胞和相近工藝自行開發，其優勢在于可使用相同的參考標準品和試劑統一監測在該宿主上生產的不同產品，適用于上游工藝足夠相似的產品線。通用型檢測試劑盒（commercial）則作為市售廣譜方案，適用于相似宿主細胞的常規檢測，但因其制備過程可能無法完全模擬目標產物的實際生產，必須嚴格評估多克隆抗體對特定產品HCP的覆蓋率，以保證檢測可靠性。三類試劑盒覆蓋從深度定制到通用篩查的不同需求。

宿主細胞蛋白（HCP）作為生物制品中來源于細胞基質的殘留雜質，具有明顯的異質性特征。其復雜性體現在三個方面：①理化特性差異：HCP涵蓋胞內及分泌蛋白，涉及關鍵生理功能，具有涵蓋區間大的等電點（pI 3-11）、分子量范圍（5-250kDa）及疏水性；②上游工藝影響：不同發酵工藝（如細胞株、培養條件）誘導獨特的翻譯后修飾（PTM），導致HCP總量與生化復雜性增加；③下游工藝與產物特性干擾：抗體、細胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝會選擇性殘留特定HCP，且產物形式（如大腸桿菌的包涵體/可溶性表達）直接影響HCP殘留譜。針對特定生產工藝開發定制化檢測方案是準確監控宿主細胞蛋白殘留的關鍵。

HEK 293細胞來源于人胚腎細胞，廣泛應用于細胞與基因治療領域，如病毒載體的生產等。盡管生物制品會經過一系列純化工藝以去除相關雜質，但殘留的微量宿主細胞蛋白（HCP）仍會引發機體的免疫應答，影響產品的質量和安全。因此，需要對生產工藝中殘留的HEK 293 HCP進行定量檢測，使其符合放行標準。湖州申科生物HEK 293 HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法）適用于HEK 293和HEK 293T來源的生物制品（重組蛋白類、細胞和基因治療類等）中宿主細胞蛋白的定量檢測。試劑盒檢測步驟少，快速，專一性強，性能穩定可靠。

LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質組分析技術，憑借其超高的分辨率與準確度在生物分析領域占據重要地位。該技術不僅能實現對低含量宿主細胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測，還可通過建立專屬蛋白質譜庫準確鑒定 HCP 的具體種類，為深入解析殘留蛋白組成提供關鍵支撐。不過，其應用過程中面臨的關鍵挑戰在于，如何優化 LC-MS 方法以滿足 GMP 規范中對產品放行檢測的嚴格要求。在質譜檢測環節，通過引入表征清晰的內標與外標蛋白，能夠準確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風險的高風險蛋白。這一技術手段不僅為開發產品專屬的 HCP ELISA 檢測方法提供有力數據支持，還能助力工藝優化升級，加速推動生物制品從研發到獲批上市的全流程進程。