宿主細胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估：法規推薦的方法有兩大類：一類是傳統2D-WB法，另一類是基于抗體親和的免疫捕獲類方法。傳統2D-WB法存在需要蛋白變性，樣品需要前處理（破壞蛋白天然表位）；轉膜效率低；易產生非特異性等缺陷，難以反映真實的覆蓋率水平。湖州申科自主開發了免疫磁珠捕獲分離技術（immunomagnetic beads separation，IMBS)，利用免疫磁珠的半液態性質，可以在懸浮的條件下與HCP樣本充分混勻結合，整個過程蛋白無需變性，結合方式與ELISA檢測條件相似，可以獲得更真實的覆蓋率結果。

湖州申科生物致力于提供符合嚴格法規要求的宿主細胞蛋白（HCP）ELISA檢測試劑盒。為確保產品滿足生物制品（如抗體藥、疫苗）申報（如IND/BLA）的監管標準，申科構建了全流程依規開發的質量體系：整個開發過程嚴格遵循ISO 13485質量標準，并滿足用戶審計要求。其開發流程明確包含三個關鍵階段：①HCP殘留定量檢測參考品開發：關鍵在于建立可靠的HCP抗原參考品，涵蓋抗原的表征、量值溯源與賦值、均一性和穩定性考察等，確保檢測的準確性與代表性。②高質量大批量抗體制備：通過優化的HCP抗原動物免疫策略，結合嚴謹的抗體質量標準（如建立標準、覆蓋率驗證）和穩定的制備工藝，生產具有高特異性和廣覆蓋度的檢測抗體，保證檢測的特異性和靈敏度。③檢測體系開發及驗證：進行嚴謹的檢測體系開發與驗證工作，其驗證方案符合ICH指導原則及藥典關于分析方法驗證的標準要求。同時，嚴格執行物料質控，并在潔凈車間環境中進行生產，確保試劑盒方法的穩健性、重現性與法規符合性。這一從抗原源頭到成品體系的標準化、合規化開發流程，是湖州申科HCP檢測產品品質與可靠性的根本保障。

湖州申科生物致力于開發接近實際工藝的商業化宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒，通過不同工藝的HCP差異化分析，針對性輸出不同細分工藝領域的HCP檢測試劑盒。實驗數據表明：針對CHO-S與CHO-K1兩種宿主細胞，二者共享2458種共同HCP（占比79.7%），但分別存在392種與236種特異HCP，凸顯工藝差異導致的殘留蛋白特異性。進一步對比B3表達菌與K2克隆菌，二者雖共享1489種相同蛋白（占比88%和85%），但仍分別檢出208種和258種獨有蛋白，差異率達12%-15%。這些發現直接驗證不同工藝路線與克隆選擇會影響HCP殘留譜的組成。因此，湖州申科提出"工藝定制化檢測"策略——通過準確識別共性及特異HCP，針對性開發細分試劑盒產品。

為什么定制化試劑盒是宿主細胞蛋白殘留檢測的優先選擇？這與檢測準確性和藥物安全性密切相關。HCP ELISA 檢測作為多分析物檢測方法，其結果準確性高度依賴校準品、抗體質量及檢測方法建立。定制化 HCP ELISA 檢測試劑盒的關鍵優勢在于，它基于更具代表性的 HCP 抗原免疫動物，由此產生的 HCP 抗體針對性更強。這種針對性抗體能極大降低 HCP 漏檢風險，尤其對生產工藝中特有的高風險 HCP 因子，展現出更優的檢出效果，為藥物的安全有效和質量可控提供有力保障。

影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的因素之一是方法選擇。酶聯免疫吸附法（ELISA法）和液相色譜-質譜聯用方法（LC-MS法）是目前HCP檢測的兩大常用方法。文獻統計顯示，目前對于總HCP定量，ELISA仍是主流方法；MS法作為對特定蛋白（例如，高風險蛋白）的鑒定和定量，已成為重要的互補手段。此外檢測過程中使用的試劑和耗材的質量直接影響檢測結果的準確性。低質量的試劑可能導致假陽性或假陰性結果。例如，抗體的特異性和親和力不足，可能導致ELISA檢測中的交叉反應；抗原代表性不強或是抗體覆蓋率低，可能會導致漏檢；稀釋液抗干擾能力弱，可能影響檢測準確性。案例研究表明，采用定制化方法替代原有商業化試劑盒后，抗原代表性和抗體覆蓋率明顯提高，HCP檢測值整體升高。

湖州申科生物結合不同宿主實際的生產工藝，通過高質量免疫原和 HCP 多抗的標準化制備流程，獲得高效價、高覆蓋率的抗體，開發了適用于大腸桿菌表達菌 (BL21) 生產工藝、克隆菌堿裂法提取質粒工藝的 SHENTEK®E.coli HCP檢測試劑盒， 適用于CHO\MDCK\HEK293\Sf9\VERO\畢赤酵母等不同宿主的 HCP 檢測試劑盒。用于中間品、原液及終產品等的HCP定量監測。為確保 ELISA 對HCP定量檢測的準確性，須對 HCP 抗體覆蓋率進行驗證。湖州申科抗體覆蓋率平臺采用2D Clean-up 試劑盒去除蛋白樣品的干擾物（洗滌劑、鹽、脂質、酚類和核酸等離子污染物），并設置2D 質控標準品進行嚴格質控，同時以陰性抗體為對照平行試驗，以提高結果準確度。