宿主細胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估：法規推薦的方法有兩大類：一類是傳統2D-WB法，另一類是基于抗體親和的免疫捕獲類方法。傳統2D-WB法存在需要蛋白變性，樣品需要前處理（破壞蛋白天然表位）；轉膜效率低；易產生非特異性等缺陷，難以反映真實的覆蓋率水平。湖州申科自主開發了免疫磁珠捕獲分離技術（immunomagnetic beads separation，IMBS)，利用免疫磁珠的半液態性質，可以在懸浮的條件下與HCP樣本充分混勻結合，整個過程蛋白無需變性，結合方式與ELISA檢測條件相似，可以獲得更真實的覆蓋率結果。

湖州申科在宿主細胞蛋白（HCP）ELISA檢測技術領域擁有深厚的積累，已成功構建高質量、全流程的自有開發平臺，覆蓋HCP檢測試劑盒研發的關鍵環節：①抗原表征與制備：基于合規平臺的HCP Reference/Antigen制備能力，采用2D凝膠電泳等先進技術確保抗原庫的代表性。②動物免疫與抗體制備：依托自有免疫動物平臺，控制免疫原設計與動物免疫過程，產出高特異性、廣覆蓋度的抗體。③體系開發與驗證：憑借成熟的技術經驗開發高靈敏度、高穩定性的檢測體系，并嚴格遵循GMP標準完成方法學驗證。該平臺通過全流程自主可控的技術整合，從源頭保證試劑盒性能的一致性與可靠性，明顯降低不同批次試劑盒的檢測變異性。其研發的HCP ELISA試劑盒已成功服務于國內外200余家生物醫藥企業，為生物制品（如單抗、疫苗）的工藝開發、質量控制及法規申報（如IND/BLA）提供符合監管要求的定制化檢測解決方案。

湖州申科生物CHO-K1 HCP 殘留檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法）基于固相酶聯免疫吸附分析法，適用于基于CHO-K1細胞生產的生物制品中宿主殘留蛋白的定量檢測。該分析方法通過在預包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標板中加入校準品或待測樣品、HRP標記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗進行共孵育。洗滌后，加入TMB底物進行顯色反應，再使用終止液終止酶催化反應。利用酶標儀在450nm波長下測讀吸光度，其吸光度與校準品或待測樣品中的HCPs濃度成正相關，通過校準品擬合的劑量-反應曲線即可計算得出待測樣品中HCPs的濃度。本試劑盒對待測樣品無需進行特殊處理，只需通過合適的稀釋比例進行適用性驗證即可直接使用。本試劑盒操作步驟少，快速，檢測專一性強，性能穩定可靠。

影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的因素之一是方法選擇。酶聯免疫吸附法（ELISA法）和液相色譜-質譜聯用方法（LC-MS法）是目前HCP檢測的兩大常用方法。文獻統計顯示，目前對于總HCP定量，ELISA仍是主流方法；MS法作為對特定蛋白（例如，高風險蛋白）的鑒定和定量，已成為重要的互補手段。此外檢測過程中使用的試劑和耗材的質量直接影響檢測結果的準確性。低質量的試劑可能導致假陽性或假陰性結果。例如，抗體的特異性和親和力不足，可能導致ELISA檢測中的交叉反應；抗原代表性不強或是抗體覆蓋率低，可能會導致漏檢；稀釋液抗干擾能力弱，可能影響檢測準確性。案例研究表明，采用定制化方法替代原有商業化試劑盒后，抗原代表性和抗體覆蓋率明顯提高，HCP檢測值整體升高。

大腸桿菌具有遺傳性狀清晰，易于培養和控制，表達水平高，成本低，周期短等特點，是優先的經濟實惠的蛋白表達系統，K-12系列和B系列菌株是工業規模上常用于生物工程的E.coli細菌株。K-12菌種、所衍生出的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大量生產質粒DNA并進一步制備細胞基因治療產品和病毒載體類疫苗。源于B系的菌株，如BL21，更適用于高效轉染表達載體和常規蛋白的表達，如：病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細胞因子、酶類等產品。湖州申科生物針對這兩種菌株的特點，分別開發了E.coli表達菌HCP殘留檢測試劑盒和E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。

湖州申科生物通過自主可控的供應鏈體系與嚴格驗證的技術性能，確保HCP檢測試劑盒的長期穩定供應與優異的分析能力。一方面，公司實現了關鍵物料的自研自產：校準品采用凍干工藝大規模制備，可穩定保存10年以上；抗體通過大動物免疫獲得，產量可滿足≥10,000盒試劑盒的生產需求，保障同批次抗體持續供應超過10年；試劑盒經多批次驗證顯示良好的批內與批間一致性。另一方面，所有產品參考ICH Q2（R2）和ICH M10法規要求完成驗證：以E.coli HCP產品為例，其線性范圍（243-1 ng/mL）的R2>0.999，各濃度點回收率偏差≤5%；準確度達81.2%-111.6%，中間精密度CV值5.7%-12.4%；LLOQ低至1.5 ng/mL，且對多種宿主細胞（如CHO、HEK293等）的交叉反應均低于檢測限。同時，通過二維電泳（檢出826個蛋白點）與質譜法（鑒定2204個蛋白點）雙重表征校準品，并采用IMBS-2D（>70%）與IMBS-MS（84.7%）正交技術驗證抗體覆蓋率，從源頭確保檢測結果的全面性與可靠性。