BloodDirectPCRMasterMix(2×)適合血液樣本的PCR擴(kuò)增主要通過(guò)以下幾個(gè)方面:1.**抗血液抑制劑能力**:該預(yù)混合溶液含有的DNA聚合酶和其他成分能夠抵抗血液樣本中的PCR抑制劑,如膽酸鹽、血紅素、蛋白質(zhì)等。2.**優(yōu)化的緩沖體系**:預(yù)混合溶液中的緩沖體系經(jīng)過(guò)特別優(yōu)化,以適應(yīng)血液樣本中的特定條件,包括pH、離子強(qiáng)度和Mg2+濃度,從而提高PCR擴(kuò)增的效率和特異性。3.**高保真DNA聚合酶**:包含的DNA聚合酶具有高保真度,能夠在復(fù)制DNA時(shí)減少錯(cuò)誤,保證擴(kuò)增結(jié)果的準(zhǔn)確性。4.**快速擴(kuò)增速度**:一些BloodDirectPCRMasterMix產(chǎn)品具有快速擴(kuò)增的特點(diǎn),可以縮短PCR實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。5.**寬泛的GC含量適應(yīng)性**:該產(chǎn)品可以用于擴(kuò)增不同GC含量的基因,包括高GC和低GC區(qū)域,提高了PCR的適用性。6.**直接使用血液樣本**:無(wú)需對(duì)血液樣本進(jìn)行DNA提取或純化,可以直接將抗凝血樣品或干血斑樣品加入PCR反應(yīng)中。7.**兼容性**:兼容多種抗凝劑,如EDTA、肝素或檸檬酸鈉,適用于不同來(lái)源的血液樣本。8.**簡(jiǎn)化的操作流程**:由于省去了DNA提取的步驟,BloodDirectPCRMasterMix簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作流程,減少了實(shí)驗(yàn)時(shí)間和潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)。在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase可以用于精確地引入特定位點(diǎn)的突變,或在基因組中插入特定的DNA序列。Recombinant Human CD300A Protein,hFc Tag
重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RecombinasePolymeraseAmplification,簡(jiǎn)稱RPA)是一種核酸擴(kuò)增技術(shù),能夠在等溫條件下快速檢測(cè)特定DNA序列。這項(xiàng)技術(shù)以其快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、對(duì)設(shè)備要求低等優(yōu)點(diǎn),在臨床快速診斷、食品檢測(cè)、防控、工業(yè)應(yīng)用、現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用潛力。**技術(shù)原理**:RPA技術(shù)主要依賴于幾種關(guān)鍵的酶和蛋白質(zhì):-**重組酶**:能夠識(shí)別并結(jié)合到單鏈核酸(寡核苷酸引物)上。-**單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)**:與被置換的單鏈DNA結(jié)合,防止其重新結(jié)合形成雙鏈。-**鏈置換DNA聚合酶**:在引物定位同源序列后,進(jìn)行鏈延伸,實(shí)現(xiàn)DNA的指數(shù)增長(zhǎng)。RPA的工作原理是,重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成,對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非常快,一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。**技術(shù)優(yōu)勢(shì)**:-**快速性**:RPA可以在37-42°C的等溫條件下快速完成核酸的擴(kuò)增,通常在10到30分鐘內(nèi)即可完成。-**靈敏度和特異性**:RPA能夠檢測(cè)低至單拷貝的核酸模板,并具有高特異性。
5'DNA腺苷酰化試劑盒的適用性非常廣,主要包括以下幾個(gè)方面:1.**miRNA克隆**:該試劑盒可用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆時(shí),3'端添加接頭的制備。2.**高通量測(cè)序建庫(kù)**:在高通量測(cè)序中,該試劑盒可用于制備5'端腺苷酰化修飾的單鏈DNA,這些DNA可以用于測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建。3.**PCR檢測(cè)**:在PCR檢測(cè)中,該試劑盒可以幫助制備具有特定5'端修飾的DNA片段,以適應(yīng)某些PCR應(yīng)用的需求。4.**單鏈DNA或RNA的5'端腺苷酰化**:試劑盒可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA或單鏈RNA轉(zhuǎn)換成5'端腺苷酰化DNA或RNA,無(wú)論3'端是否進(jìn)行了氨基化等封閉。5.**環(huán)狀DNA生成**:在不存在ATP的條件下,5'DNA/RNAAdenylase可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA生成環(huán)狀DNA。6.**RNALigation**:該試劑盒包含的MthRNA連接酶,可以用于RNA的連接反應(yīng),尤其是在需要5'端腺苷酰化DNA作為連接接頭時(shí)。7.**科研實(shí)驗(yàn)**:所有提到的產(chǎn)品信息都明確指出,5'DNA腺苷酰化試劑盒用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途。
5'DNA腺苷酰化試劑盒通過(guò)特定的酶催化反應(yīng),將5'-磷酸化的單鏈DNA(pDNA)轉(zhuǎn)化為5'-腺苷酰化DNA(AppDNA)。以下是啟用5'-磷酸化的單鏈DNA的一般步驟:1.**準(zhǔn)備反應(yīng)體系**:-根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū),準(zhǔn)備所需的反應(yīng)組分,包括5'-磷酸化的單鏈DNA、腺苷酰化酶(如Adenylase或MthRNA連接酶)、ATP和相應(yīng)的緩沖液。2.**混合組分**:-將5'-磷酸化的單鏈DNA與腺苷酰化酶、ATP和緩沖液混合在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)容器中。3.**孵育反應(yīng)**:-將混合好的反應(yīng)體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時(shí)間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉(zhuǎn)移到DNA的5'端。4.**酶失活**:-反應(yīng)完成后,在85℃孵育5分鐘以失活腺苷酰化酶,這一步是為了防止后續(xù)的去腺苷酰化現(xiàn)象,確保腺苷酰化比率不下降。5.**產(chǎn)物收集**:-由于轉(zhuǎn)化效率高,通常不需要進(jìn)行凝膠純化步驟。可以通過(guò)乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA產(chǎn)物。6.**產(chǎn)物應(yīng)用**:-收集的腺苷酰化DNA可以直接用于后續(xù)的克隆、測(cè)序、連接或其他分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。7.**注意事項(xiàng)**:-確保所有操作在無(wú)RNA酶和無(wú)DNA酶的環(huán)境中進(jìn)行,以避免污染。-使用時(shí)需注意反應(yīng)體系的準(zhǔn)確性,確保底物、酶和ATP的比例適當(dāng)。
dNTPMix(脫氧核苷酸三磷酸混合溶液)的穩(wěn)定性是進(jìn)行PCR和其他DNA合成實(shí)驗(yàn)時(shí)的重要因素。以下是一些關(guān)于dNTPMix穩(wěn)定性的關(guān)鍵點(diǎn):1.**儲(chǔ)存條件**:dNTPMix應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C的條件下,以保持其穩(wěn)定性和活性。2.**避免反復(fù)凍融**:dNTPMix應(yīng)避免多次凍融,因?yàn)檫@可能會(huì)影響其穩(wěn)定性。3.**使用頻率**:如果使用頻率較高,使用后應(yīng)以-20°C儲(chǔ)存。4.**長(zhǎng)期儲(chǔ)存**:對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存或使用頻率較低的情況,建議將dNTPMix儲(chǔ)存在-70°C以保持好的狀態(tài)。5.**質(zhì)量控制**:dNTPMix應(yīng)不含DNase和RNase,以避免DNA或RNA的降解。6.**純度**:dNTPMix的純度通常≥99%(HPLC檢測(cè)),確保了其在實(shí)驗(yàn)中的可靠性。7.**pH調(diào)節(jié)**:dNTPMix通常用超純水配制,并通過(guò)高純度NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至約7.0,以保持其穩(wěn)定性。8.**有效期**:在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下,dNTPMix的有效期通常為2年或更長(zhǎng)時(shí)間。9.**使用注意事項(xiàng)**:使用dNTPMix時(shí),應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室防護(hù)裝備,如實(shí)驗(yàn)服和一次性手套,以確保操作安全。將Cas9/sgRNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞中。可以使用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染、電穿孔或其他轉(zhuǎn)染技術(shù) 。Recombinant Human CEACAM-1/CD66a (His Tag)
在一項(xiàng)研究中,比較了具有不同NLS融合的Cas9蛋白和Cas9 mRNA在斑馬魚(yú)基因組編輯中的效率。Recombinant Human CD300A Protein,hFc Tag
合成互補(bǔ)DNA(cDNA)的試劑盒是一種實(shí)驗(yàn)室工具,用于從RNA模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程合成DNA。逆轉(zhuǎn)錄是一種酶促反應(yīng),其中RNA模板被逆轉(zhuǎn)錄酶(一種特殊的DNA聚合酶)讀取,并根據(jù)RNA序列合成一條互補(bǔ)的DNA鏈。這個(gè)過(guò)程在分子生物學(xué)研究中非常重要,因?yàn)樗试S科學(xué)家從RNA樣品中獲取遺傳信息,并進(jìn)行進(jìn)一步的分析和應(yīng)用。cDNA合成試劑盒通常包含以下關(guān)鍵組分:1.**逆轉(zhuǎn)錄酶**:一種特殊的酶,能夠以RNA為模板合成DNA鏈。例如,M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶是一種常用的逆轉(zhuǎn)錄酶。2.**RNase抑制劑**:一種蛋白質(zhì),可以防止RNA樣品在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被環(huán)境中的RNase酶降解。3.**緩沖液**:提供適宜的化學(xué)環(huán)境,保證逆轉(zhuǎn)錄酶的活性和反應(yīng)的順利進(jìn)行。4.**dNTPs**:四種去氧核苷酸三磷酸(dATP、dCTP、dGTP和dTTP),是合成DNA鏈的原料。5.**引物**:短的單鏈DNA或RNA基礎(chǔ)片段,用于啟動(dòng)cDNA的合成。常見(jiàn)的引物類型包括oligo(dT)引物(針對(duì)mRNA的poly(A)尾)、隨機(jī)引物或特異性引物。6.**水**:通常是無(wú)核酸酶的水,以避免樣品被污染。Recombinant Human CD300A Protein,hFc Tag
重組人TNFSF12蛋白(hFcTag)是一種在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的重組蛋白,融合了hFc標(biāo)簽,便于純化和檢測(cè)。TNFSF12(TumorNecrosisFactorSuperfamilyMember12),也稱為TWEAK(TNF-likeweakinducerofapoptosis),是TNF超家族的重要成員,廣參與免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞存活、炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)。它在多種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,尤其是在免疫細(xì)胞的啟動(dòng)和組織損傷后的修復(fù)過(guò)程中。TNFSF12的功能與機(jī)制TNFSF12通過(guò)其胞外區(qū)與受體TNFRSF12A(也稱為TWEAKR或Fn14)結(jié)合,啟動(dòng)下游的信號(hào)通路。TNFSF12的信號(hào)轉(zhuǎn)...