PCR預混合溶液是一種為聚合酶鏈反應(PCR)實驗預先配制好的混合試劑,它包含進行PCR所需的大部分或全部成分,除了特定的DNA模板、引物和可能的水之外。這種預混合溶液的設計旨在簡化實驗步驟,減少實驗過程中的誤差,提高實驗的重復性和效率。通常,PCR預混合溶液包含以下成分:-**DNA聚合酶**:負責在PCR過程中合成新的DNA鏈。-**dNTPs**(脫氧核苷三磷酸):是DNA合成的原料,包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP。-**緩沖體系**:提供適宜的pH和離子環境,保證DNA聚合酶的活性。-**Mg2+**:作為DNA聚合酶的輔助因子,影響酶的活性和PCR的特異性。-**穩定劑**:延長預混合溶液的有效期和穩定性。-**染料**(可選):如溴酚藍或類似物質,用于在電泳時觀察DNA條帶。PCR預混合溶液的使用可以減少實驗者在每次實驗時手動添加各種成分的需要,從而節省時間并降低污染的風險。此外,一些預混合溶液還可能包含其他添加劑,比如增強劑或保護劑,以提高PCR的效率和穩定性。利用牛痘DNA拓撲異構酶I的連接原理,可以在無需DNA連接酶的情況下,快速高效地連接DNA片段,實現克隆。Recombinant Human sTNF RII/TNFRSF1B
pA-Tn5轉座酶是一種經過特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5轉座酶組成,具有以下主要應用:1.**高通量測序建庫**:pA-Tn5轉座酶可以用于快速構建用于高通量測序的DNA文庫,通過其轉座酶活性實現DNA片段化,同時加上測序接頭,簡化了傳統DNA測序建庫的多步過程。2.**CUT&Tag技術**:這是一種新興的蛋白質與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉座酶利用ProteinA與特定抗體結合,將轉座酶帶到目標蛋白附近進行DNA切割和標簽添加,實現對蛋白質結合位點的高通量測序分析。CUT&Tag技術具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復性等優點,適用于表觀遺傳學、干細胞等領域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉座酶也可用于ATAC-seq實驗,這是一種研究染色質可及性的方法,通過轉座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質DNA,然后在切割位點加上測序接頭,進行后續的測序分析。4.**轉錄組測序快速建庫**:有研究開發了基于Tn5轉座酶的轉錄組測序快速建庫方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5轉座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,簡化了建庫過程,適用于單細胞轉錄組測序,提高了樣本的利用率和測序速度。
dNTPMix(脫氧核苷酸三磷酸混合溶液)的穩定性是進行PCR和其他DNA合成實驗時的重要因素。以下是一些關于dNTPMix穩定性的關鍵點:1.**儲存條件**:dNTPMix應儲存在-20°C的條件下,以保持其穩定性和活性。2.**避免反復凍融**:dNTPMix應避免多次凍融,因為這可能會影響其穩定性。3.**使用頻率**:如果使用頻率較高,使用后應以-20°C儲存。4.**長期儲存**:對于長期儲存或使用頻率較低的情況,建議將dNTPMix儲存在-70°C以保持好的狀態。5.**質量控制**:dNTPMix應不含DNase和RNase,以避免DNA或RNA的降解。6.**純度**:dNTPMix的純度通常≥99%(HPLC檢測),確保了其在實驗中的可靠性。7.**pH調節**:dNTPMix通常用超純水配制,并通過高純度NaOH溶液調節pH值至約7.0,以保持其穩定性。8.**有效期**:在適當的儲存條件下,dNTPMix的有效期通常為2年或更長時間。9.**使用注意事項**:使用dNTPMix時,應穿戴適當的實驗室防護裝備,如實驗服和一次性手套,以確保操作安全。
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease)高度特異性地作用于5'端磷酸化的雙鏈DNA主要通過以下幾個方面實現:1.**結構特異性識別**:Lambda核酸外切酶具有識別特定DNA結構的能力,特別是5'端磷酸化的雙鏈DNA。這種識別能力通常由酶的活性位點結構決定,能夠與5'-磷酸基團形成特定的相互作用。2.**酶活性位點**:酶的活性位點含有氨基酸殘基,這些殘基能夠與5'-磷酸基團形成氫鍵或其他非共價相互作用,從而穩定酶與DNA的結合。3.**切割機制**:Lambda核酸外切酶通過水解5'-磷酸二酯鍵來降解DNA鏈。它從5'端開始,逐個移除核苷酸,直到遇到非5'-磷酸化的末端或遇到結構上的障礙。4.**低活性對非特異性底物**:對于5'-羥基(OH)末端的DNA或單鏈DNA,Lambda核酸外切酶的活性降低,因為這些底物缺乏與酶活性位點結合所需的特異性相互作用。5.**酶動力學**:Lambda核酸外切酶對5'-磷酸化雙鏈DNA的酶動力學參數(如Km和Vmax)與對非特異性底物的參數有差異,這反映了其對特異性底物的高親和力和高催化效率。6.**過程性(Processivity)**:一旦Lambda核酸外切酶結合到特異性底物上,它可以連續移除多個核苷酸,而不需要頻繁地與底物解離和重新結合,這增加了酶的效率。牛痘DNA拓撲異構酶I應儲存在-20°C的環境中,這有助于保持其活性。在這種條件下,該酶可以保存長達3年。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一種用于合成互補DNA(cDNA)的試劑盒,它通過逆轉錄過程從信使RNA(mRNA)或總RNA模板合成cDNA的鏈。這類試劑盒通常包含逆轉錄酶(ReverseTranscriptase,RT)和其他必要的組分,以確保高效和準確的cDNA合成。RNaseH-表示該試劑盒使用的逆轉錄酶缺乏RNaseH活性,這意味著在合成cDNA鏈的過程中不會發生RNA的降解,從而可以產生更高產量的全長cDNA,特別是從較長的模板(可達13kb)。該試劑盒通常包括以下組分:-逆轉錄酶,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通過點突變完全消除了RNaseH活性。-RiboLockRNaseInhibitor,這是一種重組蛋白,可有效保護RNA在高達55°C的溫度下不受RNases的降解。-緩沖液、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他輔助成分,以支持cDNA合成反應。-有時還包括用于去除RNA樣品中污染的基因組DNA的DNaseI。合成的cDNA可以作為PCR或實時PCR的模板直接使用,也適用于第二鏈cDNA合成或線性RNA放大。此外,可以在cDNA合成過程中加入放射性或非放射性標記的核苷酸,以便在包括微陣列在內的雜交實驗中作為探針使用。在MAGE-A3基因序列的C末端添加His標簽和Avi標簽序列。His標簽有助于通過金屬螯合親和層析進行蛋白純化。Recombinant Human Siglec-9 Protein,hFc Tag
在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase 可用于目的基因或編輯工具的克隆,減少克隆過程中的非目標突變。Recombinant Human sTNF RII/TNFRSF1B
磁珠法質粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米分離技術和細菌細胞的SDS堿裂解法從菌體中提取高質量質粒DNA的實驗工具。以下是一些關于磁珠法質粒小量抽提試劑盒的關鍵信息:1.**操作簡便性**:-操作快速簡單,可以在60分鐘內完成96個不同樣品的提取,實現質粒提取的高通量化和自動化。2.**高純度和高產量**:-抽提得到的質粒純度高,OD260/OD280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/OD230比值大于2.0,可以直接用于轉化、DNA測序、PCR和酶切等后續實驗。3.**試劑盒組件**:-包含BufferMP1、BufferMP2、BufferMP3、PureMagBeads、BufferMPB、TEBuffer(pH8.0)、RNaseA等組分。4.**應用范圍**:-適用于從大腸桿菌中抽提小量質粒,所得質粒可直接用于細胞轉染、DNA測序、PCR等實驗。5.**效率和純度**:-與同類產品相比,提取效率更高,獲得質粒的純度更高;與柱式法相比,可減少離心次數,獲得完整性更好的質粒。6.**注意事項**:-例如,SgMagBeads需要充分洗滌和干燥,以保證無乙醇殘留,并且在吸取上清時避免吸入SgMagBeads。7.**保存條件**:-室溫保存,有效期一年。磁珠長期不使用時,可以4℃保存以延長保存時間。
重組人SLAMF6蛋白是一種在哺乳動物細胞中表達的重組蛋白,主要包含SLAMF6的胞外區,融合了hFc標簽,便于純化和檢測。SLAMF6(Signaling Lymphocyte Activation Molecule Family Member 6),也稱為NTB-A(Natural Killer T-Binding Antigen),是SLAM家族的重要成員,廣表達于免疫細胞(如T細胞、B細胞、NK細胞和巨噬細胞)表面,通過同型或異型相互作用調節免疫細胞的啟動和信號轉導。SLAMF6的功能與機制SLAMF6在免疫細胞的啟動和信號轉導中發揮重要作用。它通過與自身或其他SLAM家族成員(如SL...