宿主細胞蛋白通常是與重要細胞功能相關的蛋白，如細胞增殖、基因轉錄、蛋白合成修飾、細胞存活、細胞凋亡等，在工藝過程中分泌或因細胞死亡或裂解而釋放。生產過程中，以下幾個因素會主要影響HCP的組成和豐度：①宿主細胞基因組調控及培養工藝：特定工藝下，潛在的HCP數量可能非常大，且非所有基因都表達，某些基因在不同的時間和條件下表達；如大腸桿菌約4300個基因，不同的工藝產物會經歷獨特的翻譯后修飾，增加了HCP的總數和生化復雜性。有研究表明，如大腸桿菌表達的蛋白，其不同蛋白之間存在數量差異，這些差異可能是對環境條件的適應性反應，但大多數 (85-90%) 有潛在免疫原性的宿主細胞蛋白在不同的發酵過程中都會出現。②產物表達方式：宿主細胞與外源基因、載體和輔助成分組成的體系可以穩定、瞬時和誘導表達；如大腸桿菌常見的表達形式有胞內表達、分泌表達、可溶性表達、不溶性的包涵體形式，以及融合和非融合表達。③純化步驟及產品本身的特性的影響：純化過程中大部分的HCP被去除(>99％)，殘留的HCP仍保留在產品中，可能與產品共結合，一起被純化。

湖州申科生物結合不同宿主實際的生產工藝，通過高質量免疫原和 HCP 多抗的標準化制備流程，獲得高效價、高覆蓋率的抗體，開發了適用于大腸桿菌表達菌 (BL21) 生產工藝、克隆菌堿裂法提取質粒工藝的 SHENTEK®E.coli HCP檢測試劑盒， 適用于CHO\MDCK\HEK293\Sf9\VERO\畢赤酵母等不同宿主的 HCP 檢測試劑盒。用于中間品、原液及終產品等的HCP定量監測。為確保 ELISA 對HCP定量檢測的準確性，須對 HCP 抗體覆蓋率進行驗證。湖州申科抗體覆蓋率平臺采用2D Clean-up 試劑盒去除蛋白樣品的干擾物（洗滌劑、鹽、脂質、酚類和核酸等離子污染物），并設置2D 質控標準品進行嚴格質控，同時以陰性抗體為對照平行試驗，以提高結果準確度。

LC-MS技術作為生物制品宿主細胞蛋白殘留檢測新趨勢，需考慮以下幾點：①穩定性：需要HCPs LC-MS檢測流程進行驗證，全流程都需要有嚴格的QC控制，確保檢測結果的一致性和穩定性。②可重復性：不同類型生物制品中HCPs提取效率不同，不同人員操作存在差異，需要在上機前通過不同方法評估HCPs的提取效率，避免人為因素造成結果重復性差。③準確度：方法開發與驗證階段，通過設立內標與定量算法，根據內標響應回算得到HCPs的含量，確保定量結果的準確性。④抗干擾能力：高豐度蛋白和特殊基質會對質譜檢測產生影響，需要通過前處理手段對高豐度蛋白或特殊的基質進行去除，以減少其對HCPs肽段在質譜檢測時的影響。⑤真實性：樣品中除HCPs以外的物質在質譜分析中同樣會產生質譜信號，需要去除復雜的背景噪音避免假陽性和假陰性的出現，建立合理標準的生信分析流程。分析流程建立過程中同樣需要建立嚴格的質控QC標準，并通過后期不同方法進行驗證，確定其標準的真實性。

湖州申科生物依托高分辨質譜技術推出宿主細胞蛋白定制化檢測服務組合，覆蓋生物制品殘留蛋白分析需求。該平臺提供四類服務：HCP蛋白檢測定制化服務；通過ELISA、雙向電泳（2D）及LC-MS/MS技術，支持常規生物制品檢測、高危及工藝相關蛋白數據庫構建以及特殊生物制品分析；抗體覆蓋率服務采用自主研發的IMBS技術結合質譜，準確評估ELISA試劑盒對工程細胞HCP的捕獲能力，并完成校準品表征；靶向HCP檢測專注于高風險殘留蛋白的方法開發；同時提供蛋白種屬鑒定服務，利用LC-MS技術溯源樣品中的物種特異性肽段。該服務體系通過多技術聯用與深度定制化策略，滿足從基礎篩查到工藝關鍵雜質監控的全維度需求。

大腸埃希氏菌(Escherichia coli，E. coli)又稱大腸桿菌，其作為模式微生物被廣泛應用于生命科學研究中。隨著基因治療產業的大力發展，大腸桿菌也被主要應用于質粒DNA（pDNA）的生產。由于質粒樣品的常見提取工藝中往往使用條件劇烈的堿溶液進行細胞裂解和蛋白質變性，使得其中的HCPs與傳統物理破碎法獲得的HCPs有較大的差異，導致其在采用免疫學原理的檢測方法時，殘留檢測結果差別較大。湖州申科生物E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒用于大腸桿菌（又名大腸埃希菌）克隆菌株相關的HCPs檢測，如DH5α、Top10、JM109等。在抗體制備時采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動物，獲得專門的抗體。適用于經堿液裂解工藝處理后的宿主細胞蛋白HCPs定量檢測。

為了更好地控制工藝和保證產品質量的穩定，各國監管機構均要求提供使用的宿主細胞蛋白殘留檢測ELISA試劑盒的抗體覆蓋率數據。一般需進行覆蓋率分析的場景一般有以下幾種情況：①臨床II期后，若是繼續使用商品化試劑盒，則需要評估試劑盒抗體覆蓋率是否可以繼續用于質量監控；②臨床III期及以后階段，產品研究者開發了平臺化或工藝專屬型的HCP監測方法，該類試劑盒在使用前要評估覆蓋率水平與商業化覆蓋水平的差異；③申報時沒有提交覆蓋率數據，監管機構可能會對企業提出發補的要求；④產品上市后發生了包括生產場地變更，工藝變更，HCP分析方法變更等因素的變更，研究者則需要評估變更前后抗體覆蓋率水平的差異，以及該差異對藥品質量與安全帶來的影響。