宿主細胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估實驗操作復雜,需要在建立實驗方法階段對關鍵步驟進行充分的驗證,以證明實驗方法的穩健性。湖州申科開發的基于磁珠捕獲的IMBS方法(immunomagnetic beads separation),在開發過程中對關鍵步驟進行了充分驗證,相關結果經過專業評審,驗證的內容如下(部分):①方法優化:針對磁珠與抗體的偶聯比例、洗滌液體積、洗滌次數、洗脫次數等關鍵參數進行優化驗證,以保證方法的穩健性;②過程質控:二維電泳存在實驗步驟多,時間跨度長,中間步驟難以控制等缺陷,因此在等電聚焦實驗部分設計了熒光標記多肽,可快速判斷等電聚焦效果。在SDS-PAGE電泳的兩側增加40 ng銀染質控,用于銀染顯色的控制;③方法重復性:針對2D分析以及LC-MS分析進行重復性確認,其中2D分析方法重復性可達到80%以上,LC-MS分析方法可到90%以上;④上樣量優化:針對2D分析以及LC-MS分析進行上樣量確認,消除上樣量差異對檢測結果帶來的影響;⑤假陽性:排除樣品與陰性抗體之間是否存在非特異性結合,確定IMBS實驗所設定的步驟、參數是否有假陽性結果存在。
湖州申科全自動 HCP ELISA 系統實現從加樣到檢測自動化,提升效率。浙江宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測
宿主細胞蛋白來源中往往同時存在核酸,胞膜脂類,培養基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準確性,需要在檢測之前進行純化前處理,同時對總蛋白檢測方法進行方法學確認。HCP是一種多蛋白質的混合物,總蛋白定量方法之間檢測結果會存在一定程度的差異,這也是導致HCP免疫檢測方法結果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結果差異較大,一般同時采用2種以上經過確認的方法檢測,再取均值。總蛋白檢測方法的定量限一般只能達到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產品校準品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產品校準品中存在稀釋誤差,需要對產品校準品進行重新標定賦值。
成都工藝特異型宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測抗體覆蓋率評估屬于定性分析,要求是穩定性好,靈敏度高,與ELISA檢測的原理相似,確保結果準確可靠。
湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內容,依托公司深耕生物制品質量控制領域十余年經驗,針對LC-MS檢測HCPs方法進行了評價與優化。同時通過對LC-MS檢測HCPs整體流程建立完整的質控,建立起一套抗干擾能力強、穩定性好、準確度高、結果真實可靠的LC-MS檢測HCPs標準方法。檢測技術平臺分成樣品制備、質譜檢測、數據生信分析及質譜結果方法驗證四部分,已使用LC-MS平臺進行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細胞HCPs抗體覆蓋率的檢測分析。
為什么定制化試劑盒是宿主細胞蛋白殘留檢測的優先選擇?這與檢測準確性和藥物安全性密切相關。HCP ELISA 檢測作為多分析物檢測方法,其結果準確性高度依賴校準品、抗體質量及檢測方法建立。定制化 HCP ELISA 檢測試劑盒的關鍵優勢在于,它基于更具代表性的 HCP 抗原免疫動物,由此產生的 HCP 抗體針對性更強。這種針對性抗體能極大降低 HCP 漏檢風險,尤其對生產工藝中特有的高風險 HCP 因子,展現出更優的檢出效果,為藥物的安全有效和質量可控提供有力保障。
湖州申科生物目前已承接常見宿主類型的HCP定制化開發,如期交付率達到100%。
目前通過Vero細胞培養的病毒有狂犬病病毒、脊髓灰質炎病毒等,種類繁多,工藝也各有千秋。湖州申科生物Vero細胞裂解型HCP殘留檢測試劑盒(一步酶聯免疫吸附法)針對工藝過程中Vero細胞裂解后產生的大量不同種類的HCPs,可定量檢測使用Vero細胞系生產并通過細胞裂解工藝收獲的生物制品中宿主細胞蛋白的殘留檢測,抗體與校準品可覆蓋近3000種蛋白。試劑盒操作簡便,提高實驗人員的時間利用率。試劑盒抗體覆蓋率為65.1%-85.1%(IMBS-2D)和76.9%(IMBS-MS,Unique Peptide≥2)。試劑盒嚴格遵循ISO13485質量體系進行生產,并按照法規要求進行了性能驗證,各項性能滿足Vero宿主細胞蛋白檢測需求。
湖州申科宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測試劑盒校準品凍干保存,穩定性超 10 年,保障長期供應。通用型宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測性能驗證
湖州申科建立宿主特異 HCP 數據庫,支持高風險蛋白準確鑒定與分析。浙江宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測
MDCK(Madin-Darby Canine Kidney,馬丁達比犬腎上皮細胞)細胞系是一種來源于犬腎的長久性細胞系,其被普遍用作流感病毒增殖與純化、流感疫苗生產等過程中的細胞基質。基于其易感性、高產高滴度、無適應性突變、易馴化等優勢,MDCK細胞成為公認的適合于流感病毒毒株分離和流感疫苗生產的細胞系。與其他產品雜質一樣,MDCK宿主殘留蛋白(HCP)可能對生物制品的安全性和有效性產生不利影響,因此在生產監測、產品放行等過程中需要對其進行定量研究并進行嚴格控制。SHENTEK® MDCK HCP殘留檢測試劑盒(一步酶聯免疫吸附法)是湖州申科生物自主研發的、具有完全自主知識產權的、實現關鍵試劑全國產化的MDCK HCP通用檢測試劑盒。本試劑盒適用于基于MDCK細胞基質的病毒增殖及純化、疫苗生產等過程中MDCK宿主殘留蛋白的定量檢測。本試劑盒操作步驟少,快速,檢測專一性強,性能穩定可靠。
浙江宿主細胞蛋白(HCP)殘留檢測