成都細胞高效轉染試劑廠家直銷
細胞轉染效率低下的幾個大坑:1.準備不足做脂質體轉染的時候,在開展正式實驗前要多做預試驗,優化轉染條件。優化轉染條件包括:脂質體的用量、DNA密度、細胞密度、脂質體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉的時候,如果電壓太大,往往會發生細胞大量死亡的情況。不同的細胞,需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預實驗,多摸索條件。對于大多數細胞來說,其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外,就是進行轉染的細胞應該處于對數生長期。處于對數生長期的細胞的抗損傷能力是較強的。細胞濃度應該處于5x106到1x107/mL之間。每次轉染的質粒應該控制在4-6μg,如果﹥10μg,轉染效率也較大降低。在...
發布時間:2024.04.07上海貴陽細胞高效轉染試劑
細胞轉染實驗簡介實驗步驟:1、細胞傳代(1)試驗準備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養皿,離心管。(2)棄掉培養皿中的培養基,用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液,消化1分鐘(37。C,5%CO2)。用手輕拍培養瓶壁,觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養基終止反應。(5)用頭多次吹吸,使細胞完全分散開。(6)將培養液裝入離心管中,1000rpm離心5min。(7)用培養液重懸細胞,細胞計數后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。(8)將合適體積完全...
發布時間:2024.04.07南京正規細胞高效轉染試劑供應商
穩定轉染細胞系的篩選:生長的細胞比不分裂的細胞更快的受到GENETICIN物品的影響。轉染后,在開始篩選前等待48-72小時,使細胞表達足夠量的抗性酶,保證在開始篩選時可以自我保護。轉染后48-72小時倒掉培養基,加入含有GENETICIN物品的培養基,物品的濃度根據劑量反應曲線確定,足夠殺死未轉染細胞。因為許多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度,包括細胞類型,培養基和血清濃度等,所以有必要對每種細胞作一個劑量反應曲線,確定較佳濃度。篩選較多可能需要一周時間,因為在致死劑量的GENETICIN物品存在條件下,細胞會分裂1-2次。在次培養細胞時使用較低劑量的物品,一般是篩選劑量...
發布時間:2024.04.06寧波細胞高效轉染試劑平均價格
細胞轉染實驗簡介實驗步驟:1、細胞傳代(1)試驗準備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養皿,離心管。(2)棄掉培養皿中的培養基,用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液,消化1分鐘(37。C,5%CO2)。用手輕拍培養瓶壁,觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養基終止反應。(5)用頭多次吹吸,使細胞完全分散開。(6)將培養液裝入離心管中,1000rpm離心5min。(7)用培養液重懸細胞,細胞計數后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。(8)將合適體積完全...
發布時間:2024.04.06深圳細胞高效轉染試劑服務電話
細胞轉染的注意事項:1.細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。因轉染試劑對細胞有毒害作用,細胞太少,容易死。一般轉染時,貼壁細胞密度為70%-90%,懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml,確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感,所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。細胞的融合度必須要達到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數細胞類型中可以獲得高表達活性。同其他啟動子,如SV40和RSV(勞斯肉瘤細菌)相比,在BHK-2...
發布時間:2024.04.06蘇州細胞高效轉染試劑進貨價
細胞轉染效率低下的幾個大坑:1.準備不足做脂質體轉染的時候,在開展正式實驗前要多做預試驗,優化轉染條件。優化轉染條件包括:脂質體的用量、DNA密度、細胞密度、脂質體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉的時候,如果電壓太大,往往會發生細胞大量死亡的情況。不同的細胞,需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預實驗,多摸索條件。對于大多數細胞來說,其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外,就是進行轉染的細胞應該處于對數生長期。處于對數生長期的細胞的抗損傷能力是較強的。細胞濃度應該處于5x106到1x107/mL之間。每次轉染的質粒應該控制在4-6μg,如果﹥10μg,轉染效率也較大降低。電...
發布時間:2024.04.06溫州細胞高效轉染試劑推薦廠家
細胞轉染為什么不能加血清:不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,比如:HeLa,293,CHO,COS7,MCF-7,HepG2等細胞,是否加血清,對不同的細胞是有不同的影響的,有些細胞是可以有血清的,有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基,其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用,轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長,過晚會引起較多細胞死亡。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋。溫州細...
發布時間:2024.04.06武漢正規細胞高效轉染試劑服務電話
轉染的注意事項:用于蛋白生產的細胞的轉染可以在添加有血清或無血清培養基中進行。但更傾向于使用無血清培養基表達蛋白,因為血清蛋白會干擾下游表達蛋白的純化。無血清培養基一般針對某一特定細胞類型優化并有幾類無血清培養基不需要添加血清,一般含有不均一的或大量的蛋白(但比添加血清的培養基低得多)。無蛋白培養基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物,限定化學成分的培養基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應用的一種。在含血清時轉染的細胞可以適應無血清培養基,無蛋白培養基或限定化學成分的培養基。在部分情況下(如293-F,293-H,COS-7和CHO-S),對于已適應無血清或無蛋白培...
發布時間:2024.04.02蕪湖武漢細胞高效轉染試劑
穩定轉染細胞系的篩選:生長的細胞比不分裂的細胞更快的受到GENETICIN物品的影響。轉染后,在開始篩選前等待48-72小時,使細胞表達足夠量的抗性酶,保證在開始篩選時可以自我保護。轉染后48-72小時倒掉培養基,加入含有GENETICIN物品的培養基,物品的濃度根據劑量反應曲線確定,足夠殺死未轉染細胞。因為許多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度,包括細胞類型,培養基和血清濃度等,所以有必要對每種細胞作一個劑量反應曲線,確定較佳濃度。篩選較多可能需要一周時間,因為在致死劑量的GENETICIN物品存在條件下,細胞會分裂1-2次。在次培養細胞時使用較低劑量的物品,一般是篩選劑量...
發布時間:2024.03.30蕪湖細胞高效轉染試劑哪里買
細胞轉染的注意事項:血清A、DNA-陽離子脂質體復合物形成時不能含血清,因為血清會影響復合物的形成。B、一般細胞對無血清培養可以耐受幾個小時沒問題,轉染用的培養液可以含血清也可以不加,但血清一度曾被認為會降低轉染效率,轉染培養基中加入血清需要對條件進行優化。C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞,可以使用營養豐富的無血清培養基,或者在轉染培養基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞,建議使用**轉染試劑。有條件的話,可以用無血清培養基代替PBS洗細胞兩遍,注意洗的時候要輕,靠邊緣緩緩加入液體,然后不要吹吸細胞而是轉動培養板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害,細胞又損失一部分,加了脂質體后,細胞受...
發布時間:2024.03.30上海正規細胞高效轉染試劑推薦廠家
細胞轉染操作方法:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是,細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有...
發布時間:2024.03.30廈門細胞高效轉染試劑直銷廠家
細胞轉染的注意事項:1.細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。因轉染試劑對細胞有毒害作用,細胞太少,容易死。一般轉染時,貼壁細胞密度為70%-90%,懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml,確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感,所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。細胞的融合度必須要達到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數細胞類型中可以獲得高表達活性。同其他啟動子,如SV40和RSV(勞斯肉瘤細菌)相比,在BHK-2...
發布時間:2024.03.30廈門細胞高效轉染試劑生產廠家
細胞轉染實驗注意事項:1.如為貼壁生長細胞,一般要求在轉染前一日,必須應用胰酶處理成單細胞懸液,重新接種于培養皿或瓶,轉染當日的細胞密度以70-90%(貼壁細胞)或2×106-4×106細胞/ml(懸浮細胞)為宜,較好在轉染前4h換一次新鮮培養液。2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質,無RNA和其他化學物質的污染,OD260/280比值應在1.8以上。3.培養基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養基,因為血清會影響復合物的形成。其實,只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清,在轉染過程中是可以使用血清的。對于貼壁細胞,一般要求在轉染前一日,用胰酶處理為單細...
發布時間:2024.03.30開封正規細胞高效轉染試劑報價
轉染的注意事項:細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。一般轉染時,貼壁細胞密度為70%-90%,懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感,所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的,CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明,對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異由于脂質體對細胞有一定的毒性,所以轉染時間一...
發布時間:2024.03.30天津正規細胞高效轉染試劑銷售廠家
細胞轉染實驗注意事項:1.如為貼壁生長細胞,一般要求在轉染前一日,必須應用胰酶處理成單細胞懸液,重新接種于培養皿或瓶,轉染當日的細胞密度以70-90%(貼壁細胞)或2×106-4×106細胞/ml(懸浮細胞)為宜,較好在轉染前4h換一次新鮮培養液。2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質,無RNA和其他化學物質的污染,OD260/280比值應在1.8以上。3.培養基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養基,因為血清會影響復合物的形成。其實,只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清,在轉染過程中是可以使用血清的。形成DNA脂復合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附。天...
發布時間:2024.03.30南昌正規細胞高效轉染試劑廠家直銷
細胞轉染簡介:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。一般的瞬時轉染 方法多采用脂質體法。南昌正規細胞高效轉...
發布時間:2024.03.29北京細胞高效轉染試劑平均價格
細胞轉染的原理、操作步驟以及小技巧:脂質體轉染操作步驟:(1)細胞培養:取6cm細胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養液,37℃CO2培養密度至40%~60%,密度過大,轉染后不利篩選細胞。(2)轉染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉染每一個孔細胞所用的量)A液:用不含血清培養基稀釋1ug質粒DNA。B液:用不含血清培養基稀釋2ul脂質體。分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。(3)吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。(4)轉染準備:用1mL不含血清培養液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養液。(5)轉染:把A/B復合物緩緩加入培養液中,搖勻,37℃溫箱置6~...
發布時間:2024.03.29細胞高效轉染試劑直銷價
細胞轉染,你至少要掌握以下幾點:主要有下面幾種方法::化學法:磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體法;物理法:電穿孔法、顯微注射法、顆粒傳遞法;細菌介導法:逆轉錄細菌、腺細菌A.陽離子脂質體法:帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。特點:簡單通用,適用性廣,轉染效率高,重復性好,但轉染時需除血清,轉染效率隨細胞類型變化大。由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞,所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。B.電穿孔法:利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾,使其形成利于核酸進入的微孔。大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋。細胞高效轉染試劑直銷...
發布時間:2024.03.29石家莊細胞高效轉染試劑
細胞轉染,你至少要掌握以下幾點:主要有下面幾種方法::化學法:磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體法;物理法:電穿孔法、顯微注射法、顆粒傳遞法;細菌介導法:逆轉錄細菌、腺細菌A.陽離子脂質體法:帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。特點:簡單通用,適用性廣,轉染效率高,重復性好,但轉染時需除血清,轉染效率隨細胞類型變化大。由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞,所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。B.電穿孔法:利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾,使其形成利于核酸進入的微孔。一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(很長轉染)。石家莊細胞高效轉染試劑如何...
發布時間:2024.03.29溫州細胞高效轉染試劑報價
影響轉染試驗的因素:細胞狀態變化:(1)轉染試劑與細胞不匹配細胞轉染較適合的不是原代細胞,也不是傳代很多次的細胞。這是因為細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變,總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。較適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到對數生長期的細胞,細胞生長旺盛,較容易轉染。(2)把握時機沒錯!轉染也有適當的時機,相比較非分裂細胞——分裂細胞往往要比靜止細胞更易于攝取并表達外源DNA。因此對大多數轉染操作而言,細胞都在轉染當天或前現在種板。同樣重要的是細胞在種板進行轉染時不應處于過度生長的狀態,如細胞數量過多,互相疊加,營養物質耗竭,代謝廢物積聚,轉...
發布時間:2024.03.29深圳細胞高效轉染試劑廠家供應
細胞轉染的注意事項:轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法:電穿孔法、顯微注射和基因;化學介導方法:如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法:有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法,則各有其特點。需要指出的一點,無論采用哪種轉染技術,要獲得較優的轉染結果,可能都需要...
發布時間:2024.03.29石家莊細胞高效轉染試劑哪家便宜
細胞轉染操作方法:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。選擇傳代次數較低并處于對數生長期的細胞進行轉染。石...
發布時間:2024.03.28貴陽正規細胞高效轉染試劑哪里買
細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染技術已成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越***。那么,羅氏都有哪些轉染試劑,其優勢都有哪些?圖1.細胞轉染過程X-tremeGENE9DNA轉染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉染試劑是脂質和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗。形成DNA脂復合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附。貴陽正規細胞高效轉染試劑哪里買細胞轉...
發布時間:2024.03.28南京細胞高效轉染試劑平均價格
細胞轉染之PEI轉染法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養皿上(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占面積達到培養皿總面積的70-90%)。將細胞置于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前2h換液(用1.5ml無血清培養基置換舊的培養基)。注:PEI轉染法對細胞生長有克制作用,在換液前細胞幾乎不生長,所以需要密度比較大時做轉染。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養皿用240μl反應總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質粒DNA(總量1-...
發布時間:2024.03.28珠海正規細胞高效轉染試劑廠家現貨
細胞轉染那些事兒:1.選擇傳代次數較低并處于對數生長期的細胞進行轉染。對大多數細胞而言,均需要在轉染當天或前現在鋪板,第二天上午進行轉染,48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞,可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。2.對于貼壁細胞,一般要求在轉染前一日,用胰酶處理為單細胞懸液,重新接種于培養皿或瓶,較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉染的效率,且支原體不會像細菌污染那么明顯,因而轉染前可用環丙沙星處理細胞以除去支原體。4.細胞轉染時需要一定的細胞密度,以70-90%(貼壁細胞)或2×106-4×106細胞/ml(懸浮細胞)為宜。使用基質珠做為固相支持可以使貼壁細...
發布時間:2024.03.23珠海細胞高效轉染試劑銷售廠家
轉染的注意事項:細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。一般轉染時,貼壁細胞密度為70%-90%,懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感,所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的,CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明,對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異陽離子脂質體轉染試劑脂質轉染試劑,以其適用宿...
發布時間:2024.03.21蕪湖正規細胞高效轉染試劑進貨價
細胞轉染效率低下的幾個大坑:1.試劑過期有時候轉染效率低下,還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉染整整半年,百思不得其解。較后發現,原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后,立馬成功。根據我的經驗,盡量使用開封半年內的,因為過了半年后,就算沒有過失效期,但是細胞毒性較大增加,而轉染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢,影響實驗進度哈。2.未加血清轉染后未及時加入血清,會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養基。根據毛博的經驗,其實也可以在原來的無血清培養基里面滴加血清。這個時候,較好不要換液,不要打擾細胞,讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入...
發布時間:2024.03.21金華正規細胞高效轉染試劑平均價格
細胞轉染,你至少要掌握以下幾點:主要有下面幾種方法::化學法:磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體法;物理法:電穿孔法、顯微注射法、顆粒傳遞法;細菌介導法:逆轉錄細菌、腺細菌A.陽離子脂質體法:帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。特點:簡單通用,適用性廣,轉染效率高,重復性好,但轉染時需除血清,轉染效率隨細胞類型變化大。由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞,所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。B.電穿孔法:利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾,使其形成利于核酸進入的微孔。當復合物接近細胞膜時,通過內吞作用形成內體進入細胞。金華正規細胞高效轉...
發布時間:2024.03.21石家莊正規細胞高效轉染試劑生產廠家
細胞轉染實驗簡介:實驗材料與器材:1、材料293T細胞、MyoD表達質粒和EGFP表達質粒、DMEM培養基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉染試劑(TransFast)2、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機、35mm培養皿、轉染管、15ml離心管、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD。利用脂質體轉染法較重要的就是防止其毒性,因此脂質體與質粒的比例,細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題,通過實驗摸索的合適轉染條件對于效率的...
發布時間:2024.03.21無錫細胞高效轉染試劑價格
細胞轉染的注意事項:細胞狀態這點非常重要,不要急于求成,一定要讓細胞處于較佳的生長狀態再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態較好,不要用傳了很多代的細胞去做,細胞的形態都會發生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體,原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變,總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化,融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此,如果觀察到轉染效率降低,可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。或者,幾種來源于經篩選,轉染效率較高細胞亞系的細胞系現...
發布時間:2024.03.21