泛素化是通過(guò)三個(gè)酶促步驟實(shí)現(xiàn)的。在ATP依賴(lài)的過(guò)程中,泛素酶(E1)催化與泛素形成活性硫酯鍵,然后轉(zhuǎn)移到泛素載體蛋白的活性位點(diǎn)半胱氨酸(E2)。泛素級(jí)聯(lián)對(duì)特定底物蛋白的選擇性依賴(lài)于E2結(jié)合酶(細(xì)胞中包含的相對(duì)較少)和泛素-蛋白連接酶(E3)之間的相互作用,迄今為止已經(jīng)鑒定出600多種這種酶。E3s是一個(gè)大的,多樣化的蛋白質(zhì)組,其特征是幾個(gè)確定的基序之一。這些包括HECT(與e6相關(guān)蛋白c端同源),RING(真正有趣的新基因)或U-box(沒(méi)有Zn2+結(jié)合配體的完整補(bǔ)充的修飾的RING基序)結(jié)構(gòu)域。而HECTE3s在泛素化過(guò)程中具有直接的催化作用,RING和U-boxE3s促進(jìn)蛋白質(zhì)泛素化。后兩種E3類(lèi)型充當(dāng)適配器類(lèi)分子。它們使E2和底物足夠接近,從而促進(jìn)底物的泛素化。雖然許多RING-typee3,如MDM2和c-Cbl,可以單獨(dú)發(fā)揮作用,但其他一些是作為更大的多蛋白復(fù)合體的組成部分,如后期促進(jìn)復(fù)合體。綜上所述,這些多面的特性和相互作用使E3s能夠利用泛素-蛋白酶體系統(tǒng),在真核生物的所有細(xì)胞中提供一種強(qiáng)大而具體的蛋白質(zhì)機(jī)制。該篩選了11種常用E2結(jié)合酶,可以篩選具有E3連接酶活性的蛋白所匹配的E2酶.在蛋白質(zhì)工程中,PNGase F可以用于改變蛋白質(zhì)的糖基化模式,以研究糖基化對(duì)蛋白質(zhì)功能的影響。Recombinant Biotinylated Human DKK1 Protein,His-Avi Tag
糖苷內(nèi)切酶H是一種重組糖苷酶,能夠?qū)-糖蛋白中的高甘露糖和某些雜合型寡聚糖的殼二糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行切割,去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖。糖苷內(nèi)切酶H克隆自褶皺鏈霉菌(Streptomycesplicatus)。并在酵母中重組表達(dá)。本產(chǎn)品帶his標(biāo)簽,常應(yīng)用于抗體及其相關(guān)蛋白完全去糖基化。另外,我司還提供其他類(lèi)型的糖苷酶,包括糖苷內(nèi)切酶S(Cat#20413ES),酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F(比活性:750000U/mL),酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F(比活性:100000U/mL)。儲(chǔ)存條件-15~-25℃保存,有效期1年。使用說(shuō)明變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg),至終體積10μL;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,冰上冷卻,離心10秒;3)加入2μL的Buffer2,8μL去離子水,總反應(yīng)體積20μL;4)加入1-2μL的EndoH,輕輕混勻。在37℃孵育1-3h。5)65℃下熱失活10分鐘。非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg)至終體積為20μL。2)加入2~5μL的EndoH,輕輕混勻。3)37°C孵育4-24h。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加EndoH的量和延長(zhǎng)孵育時(shí)間。Fibrinogen Binding Inhibitor Peptide全長(zhǎng)跨膜蛋白CB1它通過(guò)與G蛋白的相互作用,調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的第二信使系統(tǒng),如cAMP水平。
RecombinantBiotinylatedHumanMSLN/MesothelinProtein,hFc-AviTag分子別名(Synonyms)Mesothelin;CAK1;MSLN;MPFSMRP表達(dá)區(qū)間及表達(dá)系統(tǒng)(Source)BiotinylatedHumanMSLN/MesothelinProteinisexpressedfromHEK293withhFctagandAvitagattheC-Terminus.ItcontainsGlu296-Gly580.[Accession|Q13421-2]分子量大小(MolecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof61.1kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto70-80kDabasedonSDS-PAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.純度(Purity)>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.活性(Activity)ELISAData:ImmobilizedAnti-MSLNAntibody,hFcTagat1μg/ml(100μl/well)ontheplate.DoseresponsecurveforBiotinylatedHumanMSLN,hFcTagwiththeEC50of18.4ng/mldeterminedbyELISA.
PreScissionProtease是一種由人鼻病毒14型的3C蛋白酶(humanrhinovirus(HRV)type143Cprotease)和GST組成的融合蛋白。該蛋白酶可在低溫下(4°C)特異識(shí)別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切。底物的識(shí)別和切割不僅依賴(lài)于融合蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)還依賴(lài)于融合蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。它可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達(dá)出的帶有酶底物識(shí)別多肽序列融合蛋白的GST標(biāo)簽進(jìn)行分離。本品由大腸桿菌中重組表達(dá),以無(wú)菌液體形式提供。產(chǎn)品性質(zhì)中文別名(ChineseSynonym)重組Prescission蛋白酶英文別名(EnglishSynonym)3Cprotease,Picornain3C,PSP來(lái)源(Source)大腸桿菌表達(dá)分子量(MolecularWeight)約46kDa物理外觀(PhysicalAppearance)無(wú)菌無(wú)色液體儲(chǔ)存緩沖液(StorageBuffer)25mMTris-HCl(pH8.0),150mMNaCl,1mMEDTA,5mMDTT,50%(V/V)Glycerin在蛋白質(zhì)的晶體學(xué)研究中,去除糖鏈可以幫助獲得去糖基化的蛋白質(zhì),這有助于更清晰地解析蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。
生物學(xué)功能纖維蛋白原在凝血過(guò)程中起到?jīng)Q定性作用。當(dāng)血管受損時(shí),凝血酶激發(fā)纖維蛋白原,轉(zhuǎn)化為不溶性的纖維蛋白,形成穩(wěn)定的凝塊,從而實(shí)現(xiàn)止血。醫(yī)學(xué)應(yīng)用凝血障礙纖維蛋白原注射液可用于先天性或獲得性纖維蛋白原缺乏癥,以及手術(shù)中的異常出血。功能性食品添加劑免疫球蛋白因其特殊的免疫生理功能,被研究作為功能性食品添加劑。藥物載體牛血清白蛋白(BSA)常作為藥物分子的載體,用于研究藥物在體內(nèi)的運(yùn)輸和代謝過(guò)程。前景展望隨著蛋白質(zhì)工程技術(shù)的發(fā)展,牛血漿中纖維蛋白原的大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用前景廣闊。未來(lái)研究應(yīng)著重于提高提取效率、降低成本,并擴(kuò)大其在新藥開(kāi)發(fā)、組織工程和診斷學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用。結(jié)論牛血漿中的纖維蛋白原不僅在凝血過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用,而且在醫(yī)學(xué)研究中具有重要價(jià)值。通過(guò)優(yōu)化提取和純化工藝,可以更好地利用這一資源,為人類(lèi)健康做出貢獻(xiàn)。PNGase F可以用于從糖蛋白上釋放完整的N-連接寡糖鏈,這在蛋白質(zhì)組學(xué)和糖生物學(xué)研究中非常有用。Recombinant Mouse KC/CXCL1
PNGase F是一種酰胺水解酶,能夠特異性地裂解糖蛋白中由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜型的寡糖。Recombinant Biotinylated Human DKK1 Protein,His-Avi Tag
大腸桿菌系統(tǒng)通常是小分子細(xì)胞質(zhì)蛋白或結(jié)構(gòu)域表達(dá)的宿主。用大腸桿菌生產(chǎn)蛋白質(zhì),由于只需要簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基和條件,因此費(fèi)用低且方便。此外,除了無(wú)細(xì)胞表達(dá),它是速度的系統(tǒng),大腸桿菌倍增時(shí)間(約20min)比酵母(2h)、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞都快。一般來(lái)說(shuō),在大腸桿菌中表達(dá)重組蛋白包括:1.將一個(gè)編碼目標(biāo)蛋白的質(zhì)粒導(dǎo)入宿主菌;2.培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期;3.誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。選擇合適的表達(dá)載體合適的宿主選定后,相應(yīng)的有許多工程化克隆位點(diǎn)和用于驅(qū)動(dòng)蛋白表達(dá)的非編碼序列的載體可用。啟動(dòng)子通常是可誘導(dǎo)的,以在細(xì)胞生長(zhǎng)到合適的密度前阻止目標(biāo)蛋白表達(dá)。大部分載體還提供目標(biāo)蛋白與一系列蛋白標(biāo)簽構(gòu)建融合蛋白的選擇。常用的大腸桿菌表達(dá)載體分為以下兩大類(lèi):E.coliRNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的載體Recombinant Biotinylated Human DKK1 Protein,His-Avi Tag
重組人TNFSF12蛋白(hFcTag)是一種在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的重組蛋白,融合了hFc標(biāo)簽,便于純化和檢測(cè)。TNFSF12(TumorNecrosisFactorSuperfamilyMember12),也稱(chēng)為T(mén)WEAK(TNF-likeweakinducerofapoptosis),是TNF超家族的重要成員,廣參與免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞存活、炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)。它在多種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,尤其是在免疫細(xì)胞的啟動(dòng)和組織損傷后的修復(fù)過(guò)程中。TNFSF12的功能與機(jī)制TNFSF12通過(guò)其胞外區(qū)與受體TNFRSF12A(也稱(chēng)為T(mén)WEAKR或Fn14)結(jié)合,啟動(dòng)下游的信號(hào)通路。TNFSF12的信號(hào)轉(zhuǎn)...