細胞凍存和復蘇操作步驟：細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則，慢速冷凍可使細胞內的水份滲出細胞外，減少細胞內形成冰晶的機會，快融以保證細胞外結晶快速融化，避免慢速融化水份滲入細胞內，再次形成胞內冰晶造成對細胞的損傷。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。無血清細胞凍存液使用方法：加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中。武漢正規無血清細胞凍存液推薦廠家

無血清細胞凍存液細胞復蘇步驟：1.從-80℃取出凍存細胞，立即放入37℃水浴鍋快速解凍。2.待細胞混合液徹底解凍融化后，立即加入1ml細胞培養基，混合。3.將混合液移至含有約5ml該細胞培養基的離心管中，1000rpm，5min離心，棄掉上清，獲取細胞沉淀。4.加入適量的新鮮細胞培養基，輕柔混勻，并將混合液轉移至培養容器，觀察細胞狀態正常后，進行后續細胞培養工作。注意事項：1.細胞在加入凍存液分裝后，應減少在外存放時間，盡快移入到-80℃較低溫冰箱。2.對于干細胞（ES細胞）等凍存時，建議在使用前對所凍存的胞進行1周以上的試驗性細胞冷凍保存培養，確認性能后再進行正式凍存。3.本款細胞凍存液含有10%DMSO，部分對DMSO敏感的細胞，建議對其進行至少1周的本產品試驗性的細胞凍存培養，確認性能后再正式凍存。南京武漢無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液：為多種保護劑組合，在細胞內外進行雙重保護，較大提高了細胞復蘇存活率。

干細胞無血清凍存液操作事項：使用說明：1.細胞消化和計數，用胰酶對待凍存的細胞進行消化，并對細胞進行計數。2.1000轉/min離心5分鐘（4℃），去掉上清。3.根據細胞計數的情況，加入適量的干細胞無血清凍存液，使細胞密度在1×106左右（或根據自己希望達到的細胞密度）。4.輕輕地重懸細胞（務必重懸均勻）。5.將重懸的細胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標記或者貼上標簽）中，旋緊凍存管蓋。6.將凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃。7.第二天將細胞從-80℃轉移到液氮中。注意事項：1.用處于對數生長期的細胞進行凍存。2.控制好胰酶的消化時間，切記消化過度，會影響復蘇效果。3.重懸細胞的過程中，請務必要輕柔，以免損傷細胞，但同時也一定要充分重懸，這樣細胞在復蘇時才不會成團。4.細胞操作請注意無菌。

無血清細胞凍存液：凍存注意：開蓋之前，用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身。以下說明適用于在6孔板內的培養物的凍存。培養物應該在適合傳代的時候進行收集和凍存。每管所含有的細胞應當來源于6孔板的1個培養孔。如果使用其他的培養器皿，請相應的調整體積。1.在室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘。2.輕輕吸走上清液，注意不要擾動細胞團。3.用血清學吸管以1mL的TBD-698重懸細胞。在打散細胞團時，盡量減少細胞聚集體分解。4.用2mL的血清學吸管將1mL的細胞聚集體轉移到標記好的凍存管中。5.用以下方法凍存細胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法，每分鐘降低1度，隨后可以在-196°C液氮長期保存。不推薦在-80°C長期保存。逐步降溫法：-20°C保存2個小時，然后-80°C中保存2個小時，隨后可以在-196°C液氮中長期保存。無血清凍存液用途：細胞保藏中心，無血清細胞凍存液用于細胞株的長期保存。

細胞凍存液是如何保護細胞的：當溫度進一步下降，細胞內外都結冰，產生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護劑，則可保護細胞免受溶質損傷和冰晶損傷。因為冷凍保護劑容易同溶液中的水分子結合，從而降低冰點，減少冰晶的形成，并且通過其摩爾濃度降低未結冰溶液中電解質的濃度，使細胞免受溶質損傷，細胞得以在較低溫條件下保存。在復蘇時，一般以很快的速度升溫，1-2分鐘內即恢復到常溫，細胞內外不會重新形成較大的冰晶，也不會暴露在高濃度的電解質溶液中過長的時間，從而無冰晶損傷和溶質損傷產生，凍存的細胞經復蘇后仍保持其正常的結構和功能。冷凍保護劑對細胞的冷凍保護效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復溫速率有關。而且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣。根據密度調整細胞凍存 液用量。南京正規無血清細胞凍存液廠家直銷

無血清細胞凍存液產品特色：即用型，無需現配，即開即用。武漢正規無血清細胞凍存液推薦廠家

細胞凍存概念：細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。武漢正規無血清細胞凍存液推薦廠家