無血清細胞凍存：在細胞培養中，細胞凍存是較關鍵環節之一，尤其在細胞治好、細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求，下面就根據降溫速度以及凍存液組分對細胞凍存做詳細介紹。根據降溫速度區分，細胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。根據凍存方式不同可以分為慢速凍存（程序降溫法）與快速凍存（非程序降溫法）。程序降溫凍存技術要點是慢凍，標準的凍存程序為降溫速率-1～-2/℃min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min。之前，常用的傳統方法是將凍存管置于4℃30分鐘--20℃60分鐘--80℃過夜-液氮罐。不過，由于步驟較多，間隔時間又長，很容易遺忘。之后，人們也開始使用程序降溫盒。將凍存管放入程序降溫盒中，再將程序降溫盒放入-80℃冰箱。以1℃/min的速度進行降溫。快速凍存即不需要經過梯度降溫，直接將細胞放入-80 ℃冰箱24h。徐州太原無血清細胞凍存液

無血清快速細胞凍存液，是一種新型的快速凍存細胞的保護液，可將細胞置于-80^C直接冷凍保存。NM4100內含天然抗凍蛋白(Naturalantifrereprotein),不含動物來源的血清成分，能夠有效提高細胞凍存活率和復蘇活力，減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全，能夠滿足大部分體外培養細胞的凍存需求。注意事項:請選擇對數生長期細胞進行凍存;凍存液加入細胞后，請盡快放入-80C冰箱凍存;3.本產品凍存細胞可以在-80°C冰箱保存3年以上;4.若需長期凍存細胞，請轉移至液氮罐中貯存;凍存液中含DMSO成分，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套。上海正規無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液產品特色：不含動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低。

凍存細胞復蘇方法：1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1ml細胞培養基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養基的試管中，混合均勻。3.離心收集培養細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4.清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細胞培養基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養瓶中。6.鏡檢后，研究者可根據各自方法和需要來進行細胞培養。

如何提高細胞凍存成功率：1.沒有控制好細胞的生長密度細胞的密度對細胞的生存質量有著重要的影響，畢竟它們是一群又不能擠著了也不能孤獨的嬌貴寶寶。密度過高會讓細胞沒有足夠的生存空間，密度過低會讓細胞無法互相連接健康生長。建議大家在細胞接種前，一定要調整好適合細胞生長的濃度，提高細胞的存活率。2.溫度控制不達標慢凍快融是細胞凍存復蘇的中心關鍵詞之一。常規的凍存操作中，都會要求嚴格的梯度降溫，常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮，一定要避免溫度原因導致細胞自取消滅；除非使用了成分經過優化、經過嚴格測試的凍存液，才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟。保存的時候也要保證整個細胞都是處于液氮的液面下方，避免溫度對細胞存活的影響。無血清細胞凍存液的優勢：不含血清，較大減少細胞污染。

無血清細胞凍存液：解凍解凍后，應該立即鋪板在預先包被好的培養皿中。上述凍存的一管細胞可以成功的鋪板到6孔板的1-2孔。1.開始之前，提前準備好以下材料：試管，恢復至室溫的培養基，預先包被的培養板，確保整個解凍復蘇程序可以在較短的時間內完成。注意：不要在37°C水浴中加熱培養基。2.在37°C水浴中快速解凍，持續溫和的在水中晃動凍存管，直到剩余少量細胞還處于凍存狀態。3.水浴中取出凍存管，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌。4.用2mL的血清移液管把細胞懸液轉移到一個15mL的錐形試管。注意：用2mL的血清移液管代替1mL的頭可以減少細胞聚集體的分解。無血清細胞凍存液：凍存細胞，無需程序降溫。廣州無血清細胞凍存液供應商

反復吹吸混勻后，分裝于細胞凍存管中，每管500ul-1000ul。徐州太原無血清細胞凍存液

細胞凍存時間和操作步驟：1、首先我們需要凍存培養液，通常細胞凍存液含10%的DMSO，或者是甘油、10-20%的小牛血清；、取對數生長期細胞，并且還需要用PBS進行清洗，需要注意在這里要丟棄掉舊的細胞凍存液；3.去除PBS，加入適量的胰蛋白酶，以覆蓋住培養皿表面為宜，然后把單層生長的細胞消化掉；然后離心1000rpm5min時間；4、去除胰蛋白酶，加入凍存培養液，輕輕吹打使細胞的分布變得均勻，調節細胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml，需要注意這是較佳的細胞密度；5、將細胞裝入凍存管之中，每管的含量應該保持在1～1.5ml之間。在凍存管上標明細名稱、時間、操作者；6、較后要說的就是細胞凍存的時間了，對于標準的凍存程序來說，需要進行梯度降溫，降溫速率-1～-2℃/min，一旦溫度達到-25℃以下時，那么就可增至-5℃～-10℃/min；等到-100℃的時候，可迅速的放入到液氮之中。也可將凍存管放入-20℃冰箱中兩小時，然后放入-70℃冰箱中進行過夜，較后取出凍存管并移入到液氮容器內。徐州太原無血清細胞凍存液