通用細胞凍存液(無血清)的簡介：隨著實驗室細胞培養的發展，除了原代培養之外，人工開發出來的細胞系的保存越來越重要。細胞冷凍的原理在于盡可能降低細胞內的晶體形成，減少細胞內水凝固所形成的高濃度溶質對細胞造成的低溫損傷，從提高細胞復蘇時的存活率。細胞凍存的數量應保證復蘇時低溫保護劑獲得稀釋，稀釋后的細胞濃度扔高于正常傳代的細胞濃度為宜，這是因為當低溫保護劑稀釋以后，該濃度一般不會對細胞造成毒性損傷。通用細胞凍存液(無血清)主要由培養基、DMSO等組成，不含血清，是一種經典的無菌凍存液。用于各種哺乳動物原代細胞、傳代細胞系、雜交瘤細胞等的凍存。無血清細胞凍存液使用方法：將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。無錫無血清細胞凍存液產品介紹

細胞凍存液的原理及配制方法：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。合肥正規無血清細胞凍存液直銷廠家將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養基中充分混勻。

無血清細胞凍存液：細胞凍存及復蘇是細胞培養技術中的重要技術，細胞凍存是細胞長期保存的重要手段。細胞凍存液，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液，其作用是將需要凍存的細胞懸浮于凍存液，供給細胞生命代謝所必須的營養物質，同時可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。在現有技術中，一般使用培養基、血清和二甲亞砜(DMSO)按照一定比例混合的方法來凍存細胞，DMSO用量為10％，過低的DMSO濃度會導致凍存效果欠佳，但高濃度的DMSO有較大毒性，會對細胞體造成傷害；且傳統凍存液配方中所使用的血清成本高，增加動物病原污染的可能性。此外，有研究表明長期與胎牛血清接觸的細胞會對溶液介質中的胎牛血清發生內吞，內吞胎牛血清后的間充質干細胞有可能發生某些蛋白表達的變化，應用于人體后可發生異種動物蛋白引起的免疫反應，不能直接用于臨床輸注。因此，利用含有血清的凍存液凍存的細胞會給臨床使用帶來一定的風險。

細胞凍存秘籍：程序1.凍存前檢查凍存前，細胞應處于指數生長期，確保細胞處于健康狀態。理想情況下，應在收獲細胞前24小時更換培養基。建議對培養物進行微生物污染物，特別是支原體的檢測，并通過適當的方法，如STR分析確定其身份。如果在培養過程中使用物品，那么建議在冷凍前1到2周不使用物品，這樣如果出現污染，可以更容易地發現。2.收集細胞通常，您可以使用常規細胞傳代的實驗程序來收獲細胞。細胞收獲期間盡可能溫和操作。本程序推薦的試劑量是針對為75平方厘米（T-75）培養瓶；若使用其他培養容器，請相應調整所用試劑量。A.使用無菌吸管，取出并丟棄培養基。請妥善處置與細胞接觸的任何材料和溶液。B.用5到10mlCMF-PBS沖洗細胞，去除所有痕量的血清。C.加入3到5ml的胰酶（在CMF-PBS中），37℃孵育。預熱酶溶液通常會縮短處理時間。無血清細胞凍存液的優勢：無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分。

細胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液，4℃預冷（新鮮配制的凍存液會產生大量的熱）；取對數生長期的細胞，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中；離心1200rpm，6min；去除上清液，逐漸加入適量預冷的細胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml；將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml；在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；到達-80℃時，則可迅速放入液氮中。無血清細胞凍存液產品特色：即用型，無需現配，即開即用。寧波正規無血清細胞凍存液報價

快速凍存即不需要經過梯度降溫，直接將細胞放入-80 ℃冰箱24h。無錫無血清細胞凍存液產品介紹

細胞凍存注意事項：1、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養液，而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。3、加培養基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度無錫無血清細胞凍存液產品介紹

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