隨著細胞治理以及細胞儲存產業發展,細胞凍存也面臨從科研應用走向產業轉化。凍存要求發生改變,因為凍存細胞要進行臨床應用,所以凍存液成分由原來血清變為無血清,無動物源成分,凍存液中使用的所有原料均應符合臨床或藥物需求。隨著細胞凍存數量增加,凍存流程簡化也成為必然趨勢,因此無血清非程序降溫凍存液應運而生。目前針對細胞治理領域,推出一款即用型的無血清細胞凍存液,這款產品是細胞凍存研究的革新,主要具有幾大特點,凍存液無血清成分、無需配制直接使用、無需程序降溫盒、不需分步降溫、即用型細胞凍存液。該款凍存液適用于臍帶、脂肪、等間充質干細胞,免疫細胞以及大多數細胞系凍存。同時該款所有成分均使用藥用級原料配制而成,完全適應細胞儲存,細胞治理以及科學研究等不同場景使用。無血清細胞凍存液:降低細胞外溶液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的數量。天津無血清細胞凍存液哪家便宜
細胞凍存液的原理及配制方法:細胞凍存是細胞培養、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在細胞建株和建系中,及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是必不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩定的細胞系或穩定分泌抗體的細胞系的時候,細胞的培養過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導致實驗失敗,如果沒有原始細胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。杭州無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液的優勢:無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分。
細胞凍存液的操作步驟:1.配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的凍存細胞培養液;2.取對數成長期的體細胞,除去舊細胞培養液,用PBS清理。3.除去PBS,添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養皿表層)把單面生長發育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm,5min;5.除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細胞培養液,用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱,記數,調整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml~1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中,每管1~1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字,凍存時間及作業者;8.凍存:標準的凍存程序流程為減溫速度-1~-2℃/min;當溫度達-25℃下列時,可升至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可快速滲入液態氮中。
細胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清,可以現用現配。除了這個方式,還可選擇20%的DMSO機上80%的小牛血清,配成兩倍的儲存液,在使用時細胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用,特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環境中保存。使用細胞凍存液需要注意以下幾點:1、在使用凍存液前,需要確保細胞凍存液已經完全融化,并要輕輕的混勻。對融化后的細胞凍存液要置于4℃的環境中保存。2、使用凍存液之前應該確保凍存前的細胞生長情況比較良好,比如說細胞需要處于對數生長期,并且凍存的時候存活率大于90%。3、在使用細胞凍存液期間,為了保證可以發揮較佳的效果,建議將細胞凍存在液氮之中,這樣可以長時間的進行保存。如果說將細胞置于-80℃的環境下保存,那么保存的時間大約為1年。4、細胞凍存液如果需要做標記的話,要使用耐受有機溶劑的馬克筆進行標記,以防被酒精或異丙醇等擦掉,不能辨識。無血清細胞凍存液的優勢:通用型,適用于凍存各種細胞系、原代細胞。
細胞凍存注意事項:離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養瓶中進行培養,第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉速和時間,轉的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規的離心分裝的方法進行復蘇,結果無有異常。無血清細胞凍存液:凍存細胞復蘇率在90%以上。武漢無血清細胞凍存液單價
無血清細胞凍存液產品性能:為了避免反復凍融,傳統的細胞凍存液,分裝成小管后置于-20℃環境下保存。天津無血清細胞凍存液哪家便宜
無血清細胞凍存液相對于含血清細胞凍存液的優勢有:1.即用型,無需現配,直接將細胞懸浮于凍存液中即可。2.通用型,適用于凍存各種細胞系、原代細胞。3.無需程序降溫,可直接放置-80℃凍存,操作簡單。4.不含血清,較大減少細胞污染。5.因不含血清,批次間差異小。6.無需液氮,-80℃冰箱長期凍存。7.可培養板整板凍存,例如雜交瘤細胞凍存時可節省篩選過程。無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分,含DMSO、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細胞凍存液。天津無血清細胞凍存液哪家便宜
無血清細胞凍存液,細胞凍存與復蘇后,平均活細胞回收比例超過80%。與含血清凍存液比較,BI無血清凍存液細胞存活率都有較佳的表,BI無血清細胞凍存液也適用于動物血清培養的細胞凍存。復蘇細胞:1.將細胞凍存管由液態氮中取出,置于37度水浴快速溶解回溫。此時可準備培養基、無菌15ml離心管、培養瓶。2.于生物安全柜內,直接以少量培養基反復沖融,使細胞團塊化凍。3.先在無菌15ml離心管中加入5ml培養基,再將化凍的細胞懸液加入離心管中。以200~300g,3分鐘離心收集細胞。4.倒去上清液,以新鮮培養基重懸細胞,移到培養瓶中培養。5.隔天更換新鮮培養基,并觀察細胞存活狀況。細胞凍存管一定要保證完全密...