細胞凍存的基本原理：細胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與，而這些蛋白酶在環境溫度低于-70℃時會集體不工作，低溫貯藏的目的是通過較低溫使細胞代謝活動近乎停止。細胞因此進入休眠狀態，使細胞“不會老”，所以可以長期保存。因為凍融過程對所有細胞和組織都是有一定傷害的，因此，需要開發出有效的技術來防止細胞死亡和損傷。低溫保護劑可保護細胞不受細胞內冰凍影響，目前多采用DMSO，甘油，乙二醇和丙二醇等滲透型低溫保護劑。它們的作用機制包括：自由進入細胞，取代水，使冰點下降，充當鹽的二次溶劑，提高細胞膜對水的通透性。可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。天津正規無血清細胞凍存液廠家供應

無血清細胞凍存液：解凍解凍后，應該立即鋪板在預先包被好的培養皿中。上述凍存的一管細胞可以成功的鋪板到6孔板的1-2孔。1.開始之前，提前準備好以下材料：試管，恢復至室溫的培養基，預先包被的培養板，確保整個解凍復蘇程序可以在較短的時間內完成。注意：不要在37°C水浴中加熱培養基。2.在37°C水浴中快速解凍，持續溫和的在水中晃動凍存管，直到剩余少量細胞還處于凍存狀態。3.水浴中取出凍存管，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌。4.用2mL的血清移液管把細胞懸液轉移到一個15mL的錐形試管。注意：用2mL的血清移液管代替1mL的頭可以減少細胞聚集體的分解。石家莊無血清細胞凍存液廠家批發價細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求。

無血清凍存液通用于各種動物細胞株（tumour細胞和常規細胞），凍存細胞可在-80℃長期保存（>5年）。配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養成分，提高細胞存活率和活力，亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。該產品添加了細胞沉降穩定劑，可延緩細胞在凍存過程中的沉降速率，防止細胞互相擠壓，影響細胞凍存效果。另外，添加了細胞膜保護劑、滲透性細胞膜內保護劑、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑，這些成分在溶液中同水分子結合，發生水合作用，弱化水的結晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇存活率。該產品配方成分明確，不含血清、不含動物源性蛋白，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全；不光適用于常規細胞系、原代細胞，同時亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。

細胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細胞培養液;2.取對數成長期的體細胞，除去舊細胞培養液，用PBS清理。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養皿表層)把單面生長發育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm，5min;5.除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱，記數，調整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字，凍存時間及作業者;8.凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可快速滲入液態氮中。1000 rmp離心5分鐘，去除離心管中的上清液，收集細胞沉淀。

含血清細胞凍存液凍存細胞時遇到的問題：1.凍存細胞時需現配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣，耗時耗力。3.含血清，細胞污染(細菌、霉菌和支原體等)的風險更高。4.血清批次、品質間差異導致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。Cellregen無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分，含DMSO、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細胞凍存液。Cellregen無血清細胞凍存液的凍存方法是：將細胞凍存懸液（凍存管或孔板）直接放置-80℃冰箱長期保存。無血清細胞凍存液使用方法：取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量，置于離心管中。石家莊正規無血清細胞凍存液廠家批發價

無血清細胞凍存液，2-8℃保存即可，無需再進行分裝。天津正規無血清細胞凍存液廠家供應

凍存細胞復蘇方法：1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1ml細胞培養基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養基的試管中，混合均勻。3.離心收集培養細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4.清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細胞培養基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養瓶中。6.鏡檢后，研究者可根據各自方法和需要來進行細胞培養。天津正規無血清細胞凍存液廠家供應