無血清細胞凍存液,通用于各種動物細胞株(tumour細胞和常規細胞),凍存細胞可在-80℃長期保存(>5年)。CellFreezingMedium配方成分明確,不含動物來源性蛋白,Chemicalbook不含血清,可減少各類細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養成分,提高細胞存活率和活力,亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。細胞凍存是細胞實驗中的一個常規技術,通常細胞凍存液的配方是由胎牛血清加上DMSO組成,由于血清含有異源成分且生長過程中可能帶來的風險Chemicalbook,故傳統的細胞凍存配方并不適于體內研究。本產品完全由化學成分組成,無動物來源,目前測試可以很好的凍存T細胞,NK細胞以及MSC等細胞。無血清細胞凍存液:一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞。上海成都無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液:采用patent的凍存配方,用包括重組人血白蛋白等多種蛋白組分替代了血清的用途。用包括DMSO在內的復合凍存保護劑替代了單一的DMSO的保護作用。復合保護劑的內部保護劑,易于穿透細胞膜,避免在細胞凍存過程中細胞內部的水分子形成冰晶損傷細胞;外部保護劑,可在溶液形成冰晶之前,在細胞膜外部競爭性的結合細胞膜表面的水分子,從而降低細胞外溶液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的數量。在細胞內部與外部的協同保護作用下,明顯降低了溫度迅速下降與溫度上升對細胞的損害,因此大幅度提高了細胞經過凍存后的復蘇存活率。深圳無血清細胞凍存液廠家供應程序降溫凍存技術要點是慢凍,標準的凍存程序為降溫速率-1~-2/℃ min。
無血清快速細胞凍存液凍存細胞復蘇方法:1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后,立即加入1ml細胞培養基于該冷凍管中與細胞混合,再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養基的試管中,混合均勻。3.離心收集培養細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min),移去上清液。4.清洗細胞,充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細胞培養基,使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后,將細胞混合液移至事先準備好的培養瓶中。6.鏡檢后,研究者可根據各自方法和需要來進行細胞培養。
無血清細胞凍存液的操作規范:1、培養細胞至對數生長晚期,顯微鏡觀察其外觀、形態、有無污染等。選擇狀態良好的細胞進行凍存操作(注:貼壁生長細胞,用胰蛋白酶消化并用完全培養基終止消化,進行細胞計數;懸浮生長細胞,進行細胞計數)。2、500~1000g離心5min,棄上清。3、加入適量的細胞凍存液,重懸細胞,使細胞濃度達到1~10×106/ml,置于凍存管中密閉。4、采取逐級降溫保存:4℃放置20min,-20℃放置30min,-70℃過夜,置于液氮罐中長期存儲。注意:務必超凈工作臺內無菌操作,避免污染。雜交瘤細胞凍存時應定期復蘇,以檢查細胞的活性和分泌抗體的穩定性。無血清凍存液特性:不含動物成分。
細胞凍存,我們應該注意哪些事項:1、凍存液比例一般是培養基:血清:DMSO=7:2:1或5:4:1;動物種屬的原代細胞凍存液可采用的比例是培養基:血清:DMSO=0:9:1,即直接用血清重懸細胞再加入DMSO,盡管如此,原代細胞的復蘇成活率還是很低。2、有文獻表明,細胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙,因為這一速度可以很好的控制細胞內部晶體的產生。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確,目前慣用的就是4℃30min、-20℃1h30min、-80℃2h后轉入液氮中。細胞凍存是細胞培養技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法。北京無血清細胞凍存液銷售廠家
無任何外源蛋白和血清,適用于各類動物細胞株凍存。上海成都無血清細胞凍存液
細胞冷凍的原理:細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。上海成都無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液,細胞凍存與復蘇后,平均活細胞回收比例超過80%。與含血清凍存液比較,BI無血清凍存液細胞存活率都有較佳的表,BI無血清細胞凍存液也適用于動物血清培養的細胞凍存。復蘇細胞:1.將細胞凍存管由液態氮中取出,置于37度水浴快速溶解回溫。此時可準備培養基、無菌15ml離心管、培養瓶。2.于生物安全柜內,直接以少量培養基反復沖融,使細胞團塊化凍。3.先在無菌15ml離心管中加入5ml培養基,再將化凍的細胞懸液加入離心管中。以200~300g,3分鐘離心收集細胞。4.倒去上清液,以新鮮培養基重懸細胞,移到培養瓶中培養。5.隔天更換新鮮培養基,并觀察細胞存活狀況。細胞凍存管一定要保證完全密...