密度過高會讓細胞沒有足夠的生存空間，密度過低會讓細胞無法互相連接健康生長。建議大家在細胞接種前，一定要調整好適合細胞生長的濃度，提高細胞的存活率。溫度控制不達標慢凍快融是細胞凍存復蘇的關鍵詞之一。常規的凍存操作中，都會要求嚴格的梯度降溫，常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮，一定要避免溫度原因導致細胞自??；除非使用了成分經過優化、經過嚴格測試的凍存液，才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟。保存的時候也要保證整個細胞都是處于液氮的液面下方，避免溫度對細胞存活的影響。無血清細胞凍存液：凍存細胞，無需程序降溫。蕪湖正規無血清細胞凍存液銷售廠家

無血清快速細胞凍存液，通用于各種動物細胞株。特別配方具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養細胞的凍存，也適用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞的凍存。產品特色：1.高安全性，完全使用醫藥品等級原料進行生產，不含動物成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產品之間有更高的產品質量一致性。2.細胞存活率高，無批次差異。3.完全凍存液配方，可直接使用，方便簡捷，可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程（省時、省力、省錢）。蕪湖正規無血清細胞凍存液銷售廠家無血清細胞凍存液使用方法：選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。

細胞凍存和復蘇實驗：一般來說，細胞進行轉移和保存，較佳的策略是進行低溫保存（-70℃~-196℃），而細胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時，細胞內的酶活性均已停止，即代謝處于完全停止狀態，故而可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程，在此溫度范圍內，冰晶呈針狀，極易招致細胞的嚴重損傷。經過前人的長期試驗，發現細胞的凍存及復蘇基本原則是慢凍速融，這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

細胞凍存，我們應該注意哪些事項：1、凍存液比例一般是培養基：血清：DMSO=7:2:1或5:4:1；動物種屬的原代細胞凍存液可采用的比例是培養基：血清：DMSO=0:9:1，即直接用血清重懸細胞再加入DMSO，盡管如此，原代細胞的復蘇成活率還是很低。2、有文獻表明，細胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙，因為這一速度可以很好的控制細胞內部晶體的產生。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確，目前慣用的就是4℃30min、-20℃1h30min、-80℃2h后轉入液氮中。將分裝好的細胞凍存管，直接置于-80 度冰箱過夜保存。

細胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；2.取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；4.離心1000rpm，5min；5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml；6.將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；7.在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；8.凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。在冰袋附近操作時，低溫避免保護劑對細胞造成損傷。蕪湖正規無血清細胞凍存液銷售廠家

無血清細胞凍存液產品特色：不含動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低。蕪湖正規無血清細胞凍存液銷售廠家

以前在另一家實驗室的時候，凍存細胞根本就沒有講究這些標準操作。凍存的細胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細胞）、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細胞酶消化后直接參與離心，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0)，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中，較久保存，幾年后細胞的活力仍沒有什么受損，照常能復蘇，成活率高。但有三點須注意：（1）一是細胞的生長狀態要好，不能長得過稀，同樣也不能過密，細胞的狀態看起來相當健康。70%密度的要保存的細胞須再長24h才能全滿，萬一細胞狀態不好，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細胞的量要留心，不能太密也不能太稀，一般1OOmm培養皿的細胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時間不能過長，一兩天后轉移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細胞，半年還有30%~50%的細胞有活性，但一年的細胞就沒有活的。蕪湖正規無血清細胞凍存液銷售廠家