重組人血清白蛋白(rHSA),特別是通過植物表達系統生產的細胞培養級產品,以其高純度和質量一致性而受到科研和工業界的重視。以下是高純度rHSA的一些關鍵特點和意義:1.**純度標準**:高純度的rHSA通常意味著蛋白質含量達到99%以上,這通常通過高效液相色譜(HPLC)、SDS-PAGE電泳等方法進行驗證。2.**內素水平**:內素水平是衡量蛋白質純度的一個重要指標。高純度rHSA的內素水平通常非常低(例如,≤0.5EU/ml),這有助于減少細胞培養中潛在的內素污染。3.**宿主細胞蛋白(HCP)殘留**:高純度rHSA的宿主細胞蛋白殘留量非常低,這有助于減少細胞培養中外來蛋白的干擾。4.**無動物源成分**:由于rHSA是通過植物表達系統生產的,因此不含有動物源性成分,這降低了動物源性疾病傳播的風險。5.**批次一致性**:高純度rHSA的生產過程通常在嚴格控制的條件下進行,確保不同批次之間的質量一致性,這對于科學研究和商業生產至關重要。6.**應用廣**:高純度rHSA在細胞培養、生物制藥、藥物載體、疫苗開發等領域有著廣的應用。7.**安全性**:高純度rHSA的生產過程不涉及動物源材料,因此可以降低血源性疾病的風險,提高產品的安全性。來源于 Thermococcus kodakaraensis,具有高熱穩定性和校正能力,適用于長片段PCR和熱啟動PCR。HA (126-138)
EndoH糖苷內切酶H在實驗中的特異性和效率通常通過以下幾個方面來確定:1.**特異性識別**:EndoH能夠特異性地識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈,這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中。2.**切割位點**:EndoH識別并切割殼二糖結構中的β-1,4-糖苷鍵連接的甘露糖型結構糖鏈,但不能切割復雜型糖鏈糖蛋白。3.**酶活性測試**:通過使用標準糖蛋白底物進行酶活性測試,可以確定EndoH的活性和效率。4.**純化效果**:EndoH的純度可大于95%,這有助于確保實驗中酶的高效性。5.**比較分析**:與其他去糖基化酶(如PNGaseF)進行比較分析,可以評估EndoH的特異性和效率。6.**應用效果**:EndoH用于基于DNA測序的熒光輔助糖電泳(DSA-FACE)分析核糖核酸酶B(ribonucleaseB,RNaseB)的糖基結構,可以比較不同酶的糖基切割功能。7.**酶切時間**:EndoH的酶切時間通常為1-3小時,這有助于評估酶的效率。8.**產品信息**:通過查看產品信息,包括產品編號、規格和目錄價,可以了解EndoH的商業可用性和應用范圍。通過這些方法,研究人員可以確保EndoH在糖鏈分析中的特異性和效率,從而獲得準確的糖鏈結構信息。Recombinant Cynomolgus LY75/CD205 Protein,His Tag在基因編輯過程中,Pfu DNA Polymerase 可用于合成高質量的單鏈或雙鏈DNA修復模板。
確保重組EGFP(增強型綠色熒光蛋白)在實驗中的穩定性和活性,可以采取以下措施:1.**適當的儲存條件**:重組EGFP通常以凍干粉形式提供,應在-20°C至-80°C的低溫條件下儲存,以保持其穩定性。避免反復凍融,因為這可能導致蛋白質結構的破壞和活性的喪失。2.**正確的復溶方法**:在無菌條件下,使用推薦的溶劑(通常是無菌去離子水或適當的緩沖液)復溶EGFP,并避免使用含有蛋白酶或氧化劑的溶液。3.**避免光照**:EGFP對光照敏感,尤其是在紫外和藍光下。在處理和儲存時應避光,使用遮光容器或在低光照條件下操作。4.**使用保護劑**:在某些情況下,添加蛋白穩定劑(如甘油、蔗糖或BSA)可以提高EGFP的穩定性。5.**避免極端pH**:EGFP的活性和穩定性可能受到pH值的影響。在實驗中使用接近其等電點pH值的緩沖系統,通常是中性或略偏堿性的條件。6.**控制溫度**:避免將EGFP暴露在極端溫度下,尤其是在高溫條件下,因為這可能導致蛋白質變性。7.**避免物理剪切力**:在操作過程中,避免劇烈攪拌或超聲處理,因為這些可能會導致蛋白質結構的破壞。
PNGaseF(肽-N-糖苷酶F)是一種普遍使用的酶,它可以從N-連接糖蛋白中去除幾乎所有類型的N-連接糖鏈。其活性和穩定性可能會在不同的pH條件下發生變化。根據NEB(NewEnglandBiolabs)提供的PNGaseF產品信息,PNGaseF的好的活性和穩定性pH為7.5。在pH7.5時,PNGaseF的活性可以達到100%。然而,酶在不同溫度下的活性表現也有所不同:在37°C時活性為100%,在30°C時也保持100%,而在23°C時活性下降到65%,17°C時為40%,在3°C時幾乎無活性。這表明PNGaseF的活性隨溫度降低而下降,盡管pH值對酶活性有重要影響,但溫度也同樣是一個重要因素。此外,PNGaseF的活性會受到SDS的抑制,因此在變性條件下進行酶切時,反應混合物中必須包含NP-40,以1:1的比例存在,以抵消SDS的抑制作用。對于非變性條件下的酶切,可能需要更多的酶和更長的孵育時間。在實驗操作中,為了確保PNGaseF的好的活性,建議按照制造商提供的推薦緩沖液和條件進行實驗。如果需要在不同的pH條件下使用PNGaseF,可能需要通過實驗優化來確定好的條件。
PreScissionProtease(PSP)是一種在蛋白質純化和分析中使用的酶,具有以下特點:1.**特異性識別**:PSP能在低溫(4°C)下特異性識別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly之間進行酶切。2.**應用**:PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等標簽,有助于純化目的蛋白。3.**純度高**:PSP的純度達到95%以上,確保了實驗的準確性和重復性。4.**穩定性好**:PSP在含有50%甘油的儲存緩沖液中,-80℃長期儲存,有效期2年;小量分裝-20℃保存,有效期6個月。5.**酶活定義**:在5℃條件下反應16小時,能夠切割100μg的GST標簽蛋白達90%以上所需的酶量定義為一個活性單位。6.**兼容性強**:PSP的酶切體系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40,10mMEDTA和500mMNaCl。7.**注意事項**:某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin會抑制PSP的酶活性50%以上。8.**優化酶切效率**:建議進行預實驗摸索實驗濃度,實際操作中,建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。Probe qPCR Mix (2×)通常含有熱啟動DNA聚合酶,這種聚合酶在高溫下激發,可以減少非特異性擴增 。溴化乙錠溶液(EB,10mg/ml,RNase free)
許多Probe qPCR Mix (2×)產品采用熱啟動DNA聚合酶,能減少非特異性擴增,提高反應的靈敏度和特異性 。HA (126-138)
重組人血清白蛋白(rHSA)在藥物載體應用中提高藥物穩定性和靶向性的機制主要包括以下幾點:1.**延長半衰期**:通過與rHSA融合,可以延長藥物分子在體內的循環時間。例如,阿必魯肽(Tanzeum)是GLP-1與HSA的融合蛋白,其半衰期可延長至5天,每周給藥一次即可。2.**提高穩定性**:rHSA作為載體,可以保護藥物分子不受體內酶解和其他降解因素的破壞,從而提高藥物的穩定性。例如,FGF21與HSA融合后,其體外穩定性提升,抗胰蛋白酶降解能力和高溫條件下的穩定性增加。3.**改善藥代動力學**:rHSA融合蛋白能夠改善藥物的藥代動力學特性,如改變藥物的分布和代謝,減少腎臟的損失,從而提高藥物在體內的濃度和療效。4.**增強靶向性**:rHSA可以通過其天然的生物學特性,如與特定受體的結合,增強藥物對特定組織或細胞的靶向性。例如,rHSA可以通過其與FcRn受體的結合,實現對瘤組織的靶向性。5.**降低免疫原性**:rHSA作為一種內源性蛋白質,具有較低的免疫原性,可以減少藥物引起的免疫反應,提高藥物的安全性和耐受性。HA (126-138)
分泌型卷曲相關蛋白2(SFRP2)是Wnt通路的天然拮抗劑,亦能以非經典方式促進血管生成與膠原成熟,在心肌梗死修復、病基質重塑及干細胞微環境維持中扮演“雙向調音師”。本品由HEK293真核分泌表達,完整覆蓋信號肽至Netrin樣結構域(aa 1-295),C端6×His標簽經Ni-NTA與凝膠過濾兩步純化,SDS-PAGE呈單一條帶,純度≥98%;內素<0.03 EU/μg,可直接用于小鼠皮下或心肌注射。功能驗證:SPR測定其與Wnt3a的抑制常數Ki=4.6 nM,100 ng/mL即可阻斷β-catenin核轉位;在HUVEC管腔形成實驗中,50 ng/mL重組SFRP2將總管長提升2.1...