鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,收集上清液;在冰水浴中,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時(shí),去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調(diào)節(jié)pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時(shí),去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀。4°C沉淀10小時(shí),去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀。溫州正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家
I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,經(jīng)過(guò)乙酸抽提、離心、滅菌、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白,屬于醫(yī)藥級(jí)別產(chǎn)品,可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿(單分子層包被),適合多種類型細(xì)胞的貼壁如肝臟細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、胚胎細(xì)胞、肌細(xì)胞、肺細(xì)胞、神經(jīng)鞘細(xì)胞等。I型膠原蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)板,規(guī)格為6/24孔板,表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附。使用這種細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞,可以獲得良好的細(xì)胞貼壁率,細(xì)胞增殖速度快,形態(tài)均一,細(xì)胞培養(yǎng)成功率高。南昌正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對(duì)初步處理的鼠尾腱進(jìn)行酶解。
膠原蛋白的應(yīng)用:1.膠原天然的緊密的纖維結(jié)構(gòu),使膠原材料顯示出很強(qiáng)的韌性和強(qiáng)度,適用于薄膜材料的制備;2.大較膠原被用作制造腸衣等可食用包裝材料.其獨(dú)特之處是:在熱處理過(guò)程中.隨著水分和油脂的蒸發(fā)和熔化.膠原幾乎與肉食的收縮率一致。而其他的可食用包裝材料還沒(méi)被發(fā)現(xiàn)具有這品質(zhì);3.由于膠原分子鏈上含有大量的親水基團(tuán).所以與水結(jié)合的能力很強(qiáng).這一性質(zhì)使膠原在食品中可以用作填充劑和凝膠;4.膠原在酸性和堿性介質(zhì)中膨脹,這一性質(zhì)也應(yīng)用于制備膠原基材料的處理工藝中。
膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一,不論來(lái)源于哪一種動(dòng)物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。膠原蛋白可分為20幾個(gè)亞型,但為常見(jiàn)的為I、II、III型膠原蛋白,即間質(zhì)膠原蛋白。其中I型為豐富且品質(zhì)優(yōu)良。劃重點(diǎn):任何動(dòng)物的膠原都有許多共性,I型膠原蛋白為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,鼠尾膠原蛋白是I型膠原蛋白。于是,動(dòng)物中心就進(jìn)行了有關(guān)“耗子尾汁”的發(fā)明:一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法并在說(shuō)明書中給出了原因:“一般的生物體中提取的膠原蛋白多為混合型,之前多從牛皮、豬皮、牛腱中提取,但這類膠原蛋白不僅有油脂等其他雜質(zhì),將無(wú)菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來(lái)制備氨蒸氣室。
鼠尾膠原:含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值)。加入760μL的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,切勿凍存,有效期一年。可直接或間接參與細(xì)胞的附著。蘇州鼠尾膠原
膠原蛋白按其應(yīng)用可以分為食品級(jí)、一般級(jí)、醫(yī)藥級(jí)。溫州正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):通過(guò)醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。1,在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。1mg/ml濃度以上,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng)。使用方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。溫州正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家
鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無(wú)相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,Wes...