提取的病毒核酸可以直接用于多種實驗,主要包括:1.**實時熒光定量PCR(qPCR)**:這是一種常用的技術,可以對病毒核酸進行定量檢測。它通過實時監(jiān)測PCR過程中的熒光信號來確定病毒核酸的數(shù)量。例如,病毒核酸檢測就是基于此技術,通過設計特異性引物和探針,對病毒的靶基因進行定性檢測。2.**逆轉錄PCR(RT-PCR)**:這項技術用于檢測RNA病毒,通過將病毒RNA逆轉錄成cDNA,然后進行PCR擴增,以檢測病毒的存在。RT-PCR技術靈敏而且用途廣,可以用于檢測細胞、組織中RNA病毒的含量。3.**等溫擴增法**:包括環(huán)介導的等溫擴增(LAMP)和切口延伸等溫擴增(NEAR),這些方法在恒溫條件下進行,無需復雜的設備,適用于快速、現(xiàn)場的病毒核酸檢測。4.**數(shù)字PCR(dPCR)**:這是一種高度靈敏的技術,可以對病毒核酸進行定量。它通過將樣本分配到成千上萬的微小反應室中,每個反應室單獨進行PCR擴增,從而實現(xiàn)對病毒核酸的精確計數(shù)。5.**核酸雜交技術**:如熒光原位雜交(FISH),可以用于檢測特定病毒核酸序列在細胞或組織中的存在和定位。FnCas12a可以識別不同的PAM序列,例如5'-TTN-3',這增加了它可以靶向的基因組區(qū)域 。Recombinant Mouse IL-17RB Protein,His Tag
BstDNAPolymerase,LargeFragment(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段)是一種常用于分子生物學實驗的酶,特別是在等溫DNA擴增技術中。以下是一些關于BstDNAPolymerase,LargeFragment的關鍵信息:1.**來源**:這種酶來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus),是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。2.**活性**:BstDNAPolymerase,LargeFragment具有5'到3'的DNA聚合酶活性,并且具有鏈置換活性,這使得它能夠用于等溫擴增反應,如環(huán)介導等溫擴增(LAMP)。3.**熱穩(wěn)定性**:由于其嗜熱特性,BstDNAPolymerase,LargeFragment能夠在較高的溫度下保持活性,通常在60-65°C。4.**應用**:-**等溫擴增**:用于LAMP和其他等溫擴增技術,這些技術不需要傳統(tǒng)的熱循環(huán)儀。-**全基因組擴增**:用于快速擴增少量DNA樣本,以進行進一步的分析。-**突變檢測**:在某些情況下,用于檢測特定基因的突變。5.**優(yōu)點**:-**高保真度**:與某些其他DNA聚合酶相比,BstDNAPolymerase,LargeFragment具有較高的保真度。-**快速擴增**:等溫擴增技術可以在短時間內快速產(chǎn)生大量DNA。Recombinant Human FGF8b ProteinEndo H 的活性受 pH 值的強烈影響,通常在酸性條件下表現(xiàn)出好的活性,一般合適 pH 范圍在 5.0-6.0 左右。
在質粒DNA提取過程中,確保DNA的完整性和活性至關重要,這通常涉及以下幾個關鍵因素:1.**溫和的裂解條件**:選擇適當?shù)牧呀夥椒▽τ诒3諨NA的完整性至關重要。對于大于15kb的質粒DNA,應采用溫和的裂解方法,如將細菌懸浮于等滲的葡萄糖溶液中,加入溶菌酶和EDTA破壞細胞壁和細胞膜,以減少對質粒DNA的機械剪切力,從而保護其完整性。2.**避免過度裂解**:在質粒提取過程中,并非裂解時間越長越好。過長的裂解時間可能會造成基因組DNA片段的污染,影響質粒的純度。3.**適當?shù)南礈旌拖疵?*:在純化過程中,適當?shù)南礈炜梢匀コ鞍踪|和其他雜質,但過度洗滌可能會導致DNA的損失。洗脫步驟中,確保洗脫液完全浸潤柱膜,以保證結合在柱膜上的質粒得以充分洗脫,避免因洗脫體積過小而影響質粒得率。4.**避免DNA的降解**:在提取過程中,添加核酸酶抑制劑可以防止DNA被核酸酶降解。同時,避免長時間將DNA暴露在室溫下,以及避免多次凍融循環(huán),這些都有助于保護DNA的完整性。5.**低溫操作**:盡量在低溫條件下進行提取操作,以減少核酸酶的活性,從而保護DNA的完整性。
BstDNA聚合酶在等溫擴增中的優(yōu)勢主要包括以下幾點:1.**高靈敏度和擴增效率**:BstDNA聚合酶具有鏈置換能力,能夠在恒溫條件下快速、高效、特異性地擴增模板。翌圣生物的BstPlusDNAPolymerase靈敏度超高,低至5copies目的基因可測,且始終能比競品更快達到閾值,擴增速率更快。2.**高dUTP耐受性**:BstPlusDNAPolymerase具有較高的dUTP耐受性,在反應體系中添加dUTP對BstPlusDNAPolymerase的靈敏度及擴增效率無影響,這使得它在防污染系統(tǒng)中表現(xiàn)出色。3.**快速擴增**:使用BstDNA聚合酶的等溫擴增技術,如LAMP,可以在15-60分鐘內實現(xiàn)109-1010倍的擴增,顯示出快速的擴增能力。4.**熱穩(wěn)定性**:BstDNA聚合酶具有較強的熱穩(wěn)定性,能在60-65℃的恒溫條件下保持活性,這使得它非常適合于不需要溫度循環(huán)的等溫擴增技術。5.**簡化的反應設置**:Bst3.0DNAPolymerase優(yōu)化了Loop-MediatedIsothermalDNAAmplification(LAMP)反應,簡化了反應設置,可以實現(xiàn)單酶RT-LAMP反應。6.**抗抑制劑能力強**:Bst3.0DNAPolymerase即使在高濃度的擴增抑制劑中,包括dUTP,也能展現(xiàn)出強大的性能。
牛痘DNA拓撲異構酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)在實驗室中的使用主要涉及以下幾個步驟:1.**DNA載體連接**:-牛痘DNA拓撲異構酶I可以用于DNA載體連接,特別是在TOPO克隆載體制備中。它能夠識別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],并與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復合物,遇到DNA的5’-OH基團后,重新連接形成完整DNA鏈。2.**接頭連接**:-在NGS建庫中,牛痘DNA拓撲異構酶I可用于接頭連接。這包括將含有特定序列的接頭A和接頭B與酶一起孵育,以實現(xiàn)DNA片段的連接。3.**操作步驟**:-**質粒解旋**:將超螺旋質粒DNA與牛痘DNA拓撲異構酶I混合,在37°C下孵育5-15分鐘,以實現(xiàn)質粒的解旋。-**接頭連接**:將接頭A(含CCCTT序列)和接頭B(含5’OH)與牛痘DNA拓撲異構酶I混合,在37°C下孵育5-15分鐘,以實現(xiàn)接頭的連接。4.**注意事項**:-雙鏈接頭A通常5’端做NH2封閉修飾,以防止自連接;接頭A的CCCTT后通常包含5-12bp尾巴,再長的尾巴會導致連接效率大幅下降。-雙鏈接頭B的5’端必須包含-OH。-由于該酶應用廣,在不同的實驗中使用策略不同,需要靈活運用,并根據(jù)具體文獻進行調整。
UBE2L3與其他E2酶的區(qū)別在于它具有特定的結構特征,它包含一個高度保守的UBC結構域,這是E2酶家族的標志。Recombinant Human VEGFR1/FLT-1 Protein,His-Avi Tag
FnCas12a系統(tǒng)的脫靶效應較低,這對于減少非目標效應和提高物質的安全性至關重要。Recombinant Mouse IL-17RB Protein,His Tag
Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在PCR產(chǎn)物的克隆中主要應用在以下幾個方面:1.**單鏈DNA的生成**:-Lambda核酸外切酶可以用于從雙鏈DNA中生成單鏈DNA。由于該酶沿5'→3'方向逐步切去5'單核苷酸,底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,因此可以用來消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,從而生成單鏈DNA,這對于某些克隆技術來說是必要的步驟。2.**PCR產(chǎn)物的克隆**:-在克隆過程中,有時需要將PCR產(chǎn)物的5'端磷酸化,以便與載體連接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA,從而在一定程度上幫助準備適合克隆的PCR產(chǎn)物。3.**減少自身環(huán)化和非特異性連接**:-在連接反應中,為了減少質粒載體的自身環(huán)化,可以使用堿性磷酸酶處理質粒DNA以去除5'磷酸基團。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA,因此在某些情況下,它可以輔助減少PCR產(chǎn)物的自身環(huán)化,尤其是在PCR產(chǎn)物和質粒載體的連接反應中。4.**提高克隆效率**:-通過消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,Lambda核酸外切酶可以幫助減少PCR產(chǎn)物的非特異性連接,從而提高克隆的效率和準確性。綜上所述,Lambda核酸外切酶在PCR產(chǎn)物的克隆中主要通過生成單鏈DNA、準備適合克隆的PCR產(chǎn)物、減少自身環(huán)化和非特異性連接以及提高克隆效率等方面發(fā)揮作用。Recombinant Mouse IL-17RB Protein,His Tag
重組人LGR-5蛋白(Recombinant Human LGR-5 Protein, hFc Tag)是一種重要的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR),屬于富含亮氨酸重復序列的GPCR家族成員,廣表達于多種組織干細胞表面,尤其在腸道隱窩、胃腺體及囊干細胞中高表達。LGR-5(Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5)是干細胞維持、組織再生及病發(fā)生過程中的關鍵標志物。該重組蛋白采用真核表達系統(tǒng)(如HEK293細胞)制備,確保了其天然構象和生物活性。其C端融合了人IgG Fc(hFc)標簽,不僅提高了蛋白的穩(wěn)定性和溶解性,還便于...