EndoS糖苷內切酶S（Endo-S）的特異性主要體現在其對糖蛋白的糖鏈結構的識別和切割能力上。以下是Endo-S的一些關鍵特異性特點：1.**糖鏈識別**：Endo-S能夠特異性識別糖鏈結構中的某些特定序列或結構，尤其是N-連接糖鏈的殼二糖重要結構。2.**切割位點**：Endo-S在糖鏈的特定位點進行切割，通常是在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間的β-N-糖苷鍵。3.**不影響抗原性**：Endo-S的切割位點選擇性高，不會破壞糖蛋白的抗原決定簇，因此在某些應用中可以保持糖蛋白的免疫原性。4.**應用多樣性**：Endo-S可以用于多種糖蛋白的去糖基化，包括抗體和其他具有N-連接糖鏈的蛋白質。5.**研究和藥物開發**：在研究糖蛋白的結構和功能時，Endo-S提供了一種工具來研究糖鏈對蛋白質性質的影響。此外，在藥物開發中，Endo-S用于制備糖鏈定點ADC化合物，通過精確控制藥物與抗體的連接點，提高藥物的療效和減少副作用。6.**兼容性**：Endo-S對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，可以接受不同生物正交基團、熒光基團等衍生物作為底物，實現抗體糖基化修飾。7.**高效性**：Endo-S在催化糖鏈轉移或切割反應中表現出高效性，有助于實現高效獲得功能修飾的糖工程抗體。UDG在結構上屬于單功能DNA糖基化酶，它通過沿著DNA鏈滑動，識別尿嘧啶分子，進行堿基切除。Recombinant Cynomolgus CD161 Protein,His-Avi Tag

NLS-Cas9-EGFPNuclease是一種融合蛋白，由Cas9核酸酶、核定位信號（NLS）和EGFP（綠色熒光蛋白）組成。這種融合蛋白的特點和科研應用如下：**特點：**1.**無DNA污染**：系統不添加外部DNA，降低了外源DNA污染的風險。2.**高切割效率**：NLS確保Cas9蛋白能夠高效地進入細胞核，從而提高DNA切割效率。3.**低脫靶效應**：由于Cas9核酸酶的瞬時表達，減少了在非目標位點切割的可能性。4.**節省時間**：與需要轉錄和翻譯的mRNA或質粒系統相比，NLS-Cas9-EGFPNuclease可以直接進入細胞核，無需等待轉錄和翻譯過程。5.**EGFP標簽**：EGFP作為報告基因，可用于追蹤或分選轉染細胞，便于通過熒光激起細胞分選（FACS）富集所需基因組編輯的細胞群，減少單細胞克隆和基因分型的勞動和成本。**科研應用：**1.**體外DNA切割篩選**：可以用于篩選高效和特異性靶向的gRNA，通過體外DNA切割實驗來驗證gRNA的效率和特異性。2.**體內基因編輯**：與特定的gRNA結合后，可以通過電穿孔或注射的方式進行體內基因編輯。3.**細胞追蹤和分選**：利用EGFP熒光標記，可以追蹤轉染細胞并進行分選，這對于研究基因編輯后的細胞群體特別有用。

PNGaseF（肽-N-糖苷酶F，Peptide-N-glycosidaseF），也稱為N-糖酰胺酶F，是一種用于糖蛋白研究的酶，它可以從糖蛋白的N-連接糖鏈上去除糖基。以下是PNGaseF的一些關鍵特性和應用：1.**作用機制**：PNGaseF能夠特異性地切割位于天冬酰胺殘基上的N-連接糖鏈，釋放出未被糖基化的多肽部分和糖鏈。2.**應用領域**：PNGaseF在糖生物學和蛋白質組學研究中非常重要，用于分析糖蛋白的糖基化模式和結構。3.**酶的來源**：PNGaseF開始是從大腸桿菌（Escherichiacoli）中分離出來的，現在也可以通過重組DNA技術在其他宿主細胞中表達。4.**酶的純度和活性**：商業化的PNGaseF通常具有高純度和高比活性，確保了在實驗中的高效性和可重復性。5.**使用條件**：PNGaseF在溫和的條件下工作，通常在pH7.5至9.0之間，溫度在37°C左右。6.**穩定性**：PNGaseF在儲存時通常需要冷凍保存，以保持其活性。在適當的條件下，該酶可以保持穩定和活躍。7.**樣品準備**：在使用PNGaseF之前，糖蛋白樣品需要適當準備，可能包括純化和緩沖液交換，以確保反應條件的一致性。

IdeSProtease是一種免疫球蛋白G（IgG）特異性降解酶，它能夠在IgG的鉸鏈區下方的一個特定位點進行切割，產生F(ab')2和Fc片段。這種酶是通過大腸桿菌（E.coli）表達系統重組表達生產的，并且經過分子改造，使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性。在生產過程中，確保IdeSProtease符合GMP（良好生產規范）標準，需要進行以下步驟：1.**分子改造**：通過分子生物學技術對IdeS進行改造，增強其穩定性和比活性。2.**大腸桿菌表達系統**：利用大腸桿菌表達系統進行IdeS的重組表達，確保無動物源性成分，減少病毒污染風險。3.**純化**：通過高度純化過程，確保IdeS的純度達到≥95%。4.**酶活定義**：1個酶活力單位定義為在37°C條件下，30分鐘內酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量。5.**質量控制**：每批產品都經過嚴格的質量控制，以確保產品批間穩定性和高穩定性。6.**儲存條件**：采用適當的儲存條件，如-30℃至-10℃凍存，確保產品在有效期內保持活性和穩定性。7.**微生物學安全性檢測**：進行無菌檢測、體內有毒物質的檢測、抗生物質殘留檢測、宿主細胞蛋白殘留檢測和病毒安全性檢測，確保產品符合微生物學安全性要求。

EndoS酶在抗體藥物偶聯物（ADCs）研究中的具體應用主要體現在糖鏈定點偶聯技術方面。根據上海藥物研究所的研究進展，EndoS酶被用于實現定點ADC化合物的“一步”制備，這是一種新穎的糖鏈定點ADC制備策略。該策略利用了新穎截短型糖結構的藥物-連接子和野生型糖苷內切酶EndoS2，將小分子細胞毒藥物直接定點連接到抗體糖基化位點，從而克服了傳統糖鏈定點ADC制備策略的限制。具體來說，研究人員通過篩選發現，EndoS2酶可以將二糖底物LacNAc轉移至去糖抗體N297位糖基化位點，并且LacNAc半乳糖6號位唾液酸化修飾不影響EndoS2的轉糖基化活性。這一發現使得EndoS2和LacNAc的組合可以直接實現野生型抗體的糖基化改造，且EndoS2對多樣化LacNAc修飾的兼容性，可以高效獲得多樣性功能修飾的巖藻糖化或去巖藻糖化的糖工程抗體。此外，研究人員還利用疊氮化修飾的LacNAc底物實現了抗體糖基化位點的“一步”疊氮化修飾，并通過點擊化學反應偶聯藥物-連接子，實現了“兩步”制備得到定點ADC化合物。

在50 μL的反應體系中，建議使用1.5 μL的5× PCR Enhancer（如果需要）和0.5 μL的Phusion DNA Polymerase。Recombinant Cynomolgus CD161 Protein,His-Avi Tag

檢測重組EGFP（增強型綠色熒光蛋白）的活性和穩定性通常涉及一系列生物化學和分子生物學實驗方法。以下是一些常用的檢測方法：1.**SDS-PAGE電泳**：-通過SDS-PAGE電泳分析EGFP的純度和分子量。-觀察是否有蛋白質降解或聚合的跡象。2.**WesternBlot**：-使用特異性的GFP抗體進行Westernblot，以檢測EGFP蛋白的存在和大小。-可以評估EGFP的表達水平和純度。3.**熒光光譜分析**：-使用熒光光譜儀測量EGFP的激發和發射光譜。-評估熒光強度和比較大激發/發射波長，以確定其熒光特性。4.**流式細胞儀分析**：-如果EGFP融合蛋白表達在細胞中，可以使用流式細胞儀分析細胞群體的熒光強度。-這有助于評估EGFP的表達水平和細胞內分布。5.**熒光顯微鏡觀察**：-在熒光顯微鏡下觀察EGFP的亞細胞定位和表達模式。-通過時間序列成像，可以評估EGFP在活細胞中的動態變化和穩定性。6.**熱穩定性分析**：-通過逐漸升高溫度并測量熒光強度的變化，可以評估EGFP的熱穩定性。-熱穩定性差的EGFP可能會在高溫下迅速失去活性。7.**光穩定性測試（光漂白實驗）**：-通過持續光照并監測熒光強度的下降（光漂白），可以評估EGFP的光穩定性。Recombinant Cynomolgus CD161 Protein,His-Avi Tag