胰島素(Insulin)作用普遍,包括調節脂肪和蛋白質的代謝以及促進細胞生長等。胰島素功能的發揮源于其對細胞的作用,進而引起組織乃至機體的整體反應。一般可將胰島素在細胞水平的作用分為三大類:代謝作用、促生長作用、以及代謝和促生長混合作用。胰島素對細胞的代謝調節作用主要是通過其與細胞膜上的胰島素受體(Insulin receptor, IR)相互作用而介導,而胰島素對細胞的促生長作用則是通過其與細胞膜上胰島素的樣生長的因子受體(IGF Receptor, IG)相互作用而介導的。在無血清細胞培養液中,常添加胰島素來維持細胞生長,調節細胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時抑制糖原、蛋白質和脂肪的分解。制備培養基需要考慮生長細胞所需的營養、酸堿度和水分含量等因素。陰溝腸桿菌分離瓊脂(ECIA)
L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是細胞生長的必須氨基酸,可作為培養細胞的能量來源,參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中狀態不穩定,它的降解速率隨保存時間,保存溫度及保存環境pH值等變化而變化。L-丙胺酰-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine)是細胞培養中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品,其在水溶液中穩定性高,即可保持長時間穩定的營養供給,也降低了分解產物造成的細胞毒性。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液(L-alanyl-L-glutamineslution)可作為哺乳動物貼壁細胞或懸浮細胞培養添加劑。與谷氨酰胺相比,L-丙胺酰-谷氨酰胺不會自行降解成氨而導致細胞毒性,作為添加物培養條件更加可控,可有效提高細胞活力。TGY瓊脂培養基液體培養基普遍應用于微生物菌株的生長、染色及細胞背景下的細胞培養等方面。
鑒別培養基(differential media) 在培養基中加入某一反應底物和指示劑,以區別某些微生物的特性從而鑒別之。又分一般鑒別培養基和選擇性鑒別培養基。只用于區別不同微生物種類的培養基稱為-般鑒別培養基,此類培養基中一般不加抑菌劑而只含指示劑,如克氏雙糖鐵培養基,含有葡萄糖及乳糖,以酚紅作為指示劑,觀察培養基底層與斜面的顏色變化判定細菌對葡萄糖和乳糖的發酵能力,加人檸檬酸鐵銨,培養后觀察是否產生黑色沉著以判定細菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而產生硫化氫;又如伊紅-美藍瓊脂,含有乳糖(反應底物)、伊紅-美藍(指示劑)用以鑒別大腸埃希菌、腸道病原菌和其他雜菌。一般鑒別培養基的特點是在配方中都含有指示劑,并可用于區別不同種類的微生物,有些鑒別培養基也可同時作為細菌的特殊需要用來分離培養某些細菌,如胰酪胨大豆瓊脂和巧克力色血瓊脂。
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時,需要注意一點:新配的培養基在經過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時,溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。孟德爾-韋伯利法可以計算培養基的可利用能量。
氨基酸是細胞合成蛋白質的基本成分,氨基酸中有12種是細胞本身不合成的,必須由培養液提供。水解乳蛋白、膠原是另外兩種較好的天然培養基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產物,呈蛋黃色粉末狀,富含氨基酸。一般配制成0.5%溶液,微酸性。膠原是從動物真皮中提取的,具改善細胞表面特性促使其附著生長的作用。特殊培養基:包括厭氧培養基和細菌L型培養基等。前者是培養專性厭氧菌的培養基,除含營養成分外,還加入還原劑以降低培養基的氧化還原電勢,如皰肉培養基、巰基乙醇酸鈉培養基等。后者是針對細胞壁缺損的細菌L型,由于胞內滲透壓較高,故培養基必須采用高滲低瓊脂培養基。培養基是用于微生物、細胞、組織等體外培養的營養精制的物質。西蒙氏檸檬酸鹽肉湯 枸櫞酸鹽肉湯
頭孢磺啶-氯苯酚-新生霉素(CIN)瓊脂 尿素吲哚培養基 吡嗪酰胺酶檢測酪蛋白大豆瓊脂 木糖-明膠培養基。陰溝腸桿菌分離瓊脂(ECIA)
合成培養基(synthetic medium) 由已知化學成分的營養物質組成的培養基。根據微生物對營養要求的不同,可完全由無機鹽或化合物組成,如:氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、維生素等,其組成成分已知,只要嚴格操作,各批次間質量可做到穩定一致。此培養基可用來檢測某種營養物或藥物對微生物代謝的影響。組織細胞培養液均屬合成培養基。合成培養基的成本較高,其價格相當于同類天然培養基的幾倍以至于幾十倍。只含幾種無機鹽的合成培養基,只適用于自養菌的培養,如培養亞硝化細菌、氧化硫桿菌等的培養基。有些培養基大部分成分為已知化學結構的營養物質,其中的個別或少數成分為未明化學成分的必須營養物,成為半合成培養基,如百日咳菌苗生產用的水解酪素培養基。陰溝腸桿菌分離瓊脂(ECIA)
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