探針DNA克隆的篩選也可采用血清學(xué)方法,所不同的是所建DNA文庫為可表達(dá)性,克隆菌落或噬斑經(jīng)裂解后釋放出表達(dá)抗原,然后用來源細(xì)菌的多克隆抗血清篩選陽性克隆,所得到多個(gè)陽性克隆再經(jīng)其它細(xì)菌的抗血清篩選,***只與本細(xì)菌抗血清反應(yīng)的表達(dá)克隆即含有此細(xì)菌的特異性基因片段,它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達(dá)文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。對(duì)于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質(zhì)的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質(zhì),然后測(cè)定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列,然后根據(jù)這一序列合成一套寡核苷酸探針。(1)電子光學(xué)系統(tǒng)。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。普陀區(qū)品牌探針品牌
電子探針(Electron Probe Microanalysis)是一種利用電子束作用樣品后產(chǎn)生的特征X射線進(jìn)行微區(qū)成分分析的儀器, [1]可以用來分析薄片中礦物微區(qū)的化學(xué)組成。除H、He、Li、Be等幾個(gè)較輕元素外,還有U元素以后的元素以外都可進(jìn)行定性和定量分析。電子探針的大批量是利用經(jīng)過加速和聚焦的極窄的電子束為探針,激發(fā)試樣中某一微小區(qū)域,使其發(fā)出特征X射線,測(cè)定該X射線的波長和強(qiáng)度,即可對(duì)該微區(qū)的元素作定性或定量分析。電子探針顯微分析原理及其發(fā)展的初期是建立在X射線光譜分析和電子顯微鏡這兩種技術(shù)基礎(chǔ)上的,該儀器實(shí)質(zhì)上就是這兩種儀器的科學(xué)組合。虹口區(qū)質(zhì)量探針售價(jià)分析范圍廣。Z>4其中,波譜:Be~U,能譜:Na~U。
為了確定探針是否與相應(yīng)的基因組DNA雜交,有必要對(duì)探針加以標(biāo)記,以便在結(jié)合部位獲得可識(shí)別的信號(hào),通常采用放射性同位素32P標(biāo)記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發(fā)展了一些用非同位素如生物素-親合素系統(tǒng)、地高辛配體等作為標(biāo)記物的方法。非同位素標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是保存時(shí)間較長,而且避免了同位素的污染。**常用的探針標(biāo)記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當(dāng)濃度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探針DNA雙鏈上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去帶有5’磷酸的核苷酸;同時(shí)又利用該酶的5’→3’聚酶活性,使32P標(biāo)記的互補(bǔ)核苷酸補(bǔ)入缺口,DNA聚合酶Ⅰ的這兩種活性的交替作用,使缺口不斷向3’的方向移動(dòng),同時(shí)DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標(biāo)記的核苷酸所取代。
2)X射線能譜分析法。無須分析晶體,而直接將探測(cè)器接收的訊號(hào)加以放大,進(jìn)行脈沖幅度分析,通過選擇不同的脈沖幅度來確定入射x射線的能量,從而區(qū)分不同的特征X射線。計(jì)算時(shí)應(yīng)用布拉格方程:nλ=2dsinθ。 [2]1、能進(jìn)行微區(qū)分析。可分析數(shù)個(gè)μm3內(nèi)元素的成分。2、能進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)分析。無需把分析對(duì)象從樣品中取出,可直接對(duì)大塊試樣中的微小區(qū)域進(jìn)行分析。把電子顯微鏡和電子探針結(jié)合,可把在顯微鏡下觀察到的顯微組織和元素成分聯(lián)系起來。3、分析范圍廣。Z>4其中,波譜:Be~U,能譜:Na~U。利用特征波長來確定元素的儀器叫做波長色散譜儀(波譜儀),利用特征能量的就稱為能量色散譜儀(能譜儀)。
探針的標(biāo)記也可以采用隨機(jī)引物法,即向變性的探針溶液加入6個(gè)核苷酸的隨機(jī)DNA小片段,作為引物,當(dāng)后者與單鏈DNA互補(bǔ)結(jié)合后,按堿基互補(bǔ)原則不斷在其3’OH端添加同位素標(biāo)記的單核苷酸,這樣也可以獲得比放射性很高的DNA探針。DNA探針是以病原微生物DNA或RNA的特異性片段為模板,人工合成的帶有放射性或生物素標(biāo)記的單鏈DNA片段,可用來快速檢測(cè)病原體。DNA探針將一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或熒光染料等標(biāo)記后制成的探針。可與固定在硝酸纖維素膜的DNA或RNA進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合,經(jīng)放射自顯影或其他檢測(cè)手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在。分析對(duì)象是固體物質(zhì)表面細(xì)小顆粒或微小區(qū)域,小范圍直徑為1μm。普陀區(qū)品牌探針推薦貨源
由分光晶體所分散的單一波長X射線被X射線檢測(cè)器接受,常用的檢測(cè)器一般是正比計(jì)數(shù)器。普陀區(qū)品牌探針品牌
在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi)、原子序數(shù)4以上的所有元素;但是對(duì)原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差。常規(guī)分析的典型檢測(cè)相對(duì)靈敏度為萬分之一,在有些情況下可達(dá)十萬分之一。檢測(cè)的***靈敏度因元素而異,一般為10-14~10-16克。用這種方法可以方便地進(jìn)行點(diǎn)、線、面上的元素分析,并獲得元素分布的圖象。對(duì)原子序數(shù)高于10、濃度高于10%的元素,定量分析的相對(duì)精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學(xué)與電子光學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的。1948年法國的R.卡斯坦制造了***臺(tái)電子探針儀。1958年法國首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處。70年代以來生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,還能觀察和研究微觀形貌、晶體結(jié)構(gòu)等。普陀區(qū)品牌探針品牌
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