轉染效率:線型PEI(LinePEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉染載體的研究比分枝狀PEI(BranchedPEI,BPEI)要早一些,過去的研究認為在不考慮具體條件,LPEI/DNA轉染復合物的細胞毒性較低,有利于細胞定位,因此與BPEI相比應該轉染效率高一些。但較近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉染復合物,從而提高轉染效率,但同時細胞毒性也增大。超很高枝的、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基,在染實驗中發現這種PEI的毒性低,但轉染效率卻較高。GenEscort是采用各種分枝狀和超很高枝狀的小分子PEI與各種含有生理條件下可降解鍵的交聯劑交聯,合成出的一系列很高枝的可降解的PEI衍生物。聚合物的分枝結構使得其具有較高的正電性,因此易于高效地包裹各種DNA、RNA分子及質粒形成小的納米顆粒,從而提高轉染效率,當所形成復合物進入細胞以后,其中所含的生理條件下可降解的化學鍵在細胞內水解,使交聯聚合物分解為無細胞毒性的小分子PEI,這樣結構的轉染試劑在體外應用可以獲得高的轉染效率和低的細胞毒性,其可降解性對體內應用也具有重要的意義。必須通過對藥物的抗性篩選進行擴增或通過表型變化進行鑒定。合肥正規細胞高效轉染試劑報價
細胞轉染實驗的方法有哪些:1..電穿孔法。通過短暫的高電場電脈沖處理細胞,沿細胞膜的電壓差異會導致細胞膜的暫時穿孔。DNA被認為是穿過孔擴散到細胞內的。電脈沖和場強的優化對于成功的轉染非常重要,因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞。理論上說電穿孔法可用于各種細胞,且不需要另外采購特殊試劑,但需要昂貴的電轉儀。此法每次轉染需要更多的細胞和DNA,因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉的條件都需要進行多次優化。2.細菌介導的傳染。傳染需要將目的基因克隆到特定的細菌體系中,經過包裝細胞的包裝得到改造后的細菌,再進行傳染。優點是轉染效率特別高,尤其是難以轉染的原代細胞、細胞。缺點是構建細菌周期長,環節多,易出錯,費用也高無錫唐山細胞高效轉染試劑對于原代細胞,可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。
細胞轉染那些事兒:1.選擇傳代次數較低并處于對數生長期的細胞進行轉染。對大多數細胞而言,均需要在轉染當天或前現在鋪板,第二天上午進行轉染,48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞,可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。2.對于貼壁細胞,一般要求在轉染前一日,用胰酶處理為單細胞懸液,重新接種于培養皿或瓶,較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉染的效率,且支原體不會像細菌污染那么明顯,因而轉染前可用環丙沙星處理細胞以除去支原體。
細胞轉染常用步驟:1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質體體積:DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA,震蕩后在加入合適體積的轉染試劑,再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養板中的培養基,用PBS或者無血清培養基清洗一次。5.加入混合液,將細胞放回培養箱中培養一個小時。6.到時后,根據細胞種類決定是否移除混合液,之后加入完全培養基繼續培養24-48小時。脂質體轉染法陽離子脂質體表面帶正電荷。
細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染技術已成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越***。那么,羅氏都有哪些轉染試劑,其優勢都有哪些?圖1.細胞轉染過程X-tremeGENE9DNA轉染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉染試劑是脂質和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗。陽離子脂質體轉染試劑脂質轉染試劑,以其適用宿主范圍廣。天津細胞高效轉染試劑推薦廠家
震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,使用前還需震蕩。合肥正規細胞高效轉染試劑報價
細胞轉染的注意事項:物品(PS)物品,比如青霉素和鏈霉素,是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。所以,在轉染培養基中不能使用物品,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染,不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素,ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,為了保證無血清培養基中細胞的健康生長,使用比含血清培養基更少的物品量~合肥正規細胞高效轉染試劑報價
如何有效提高細胞轉染實驗效率:1.選擇高效的轉染方法不同轉染試劑有不同的轉染方法,但大多大同小異。轉染時應跟據具體轉染試劑推薦的方法,但也要注意,因不同實驗室培養的細胞性質不同,質粒定量差異,操作手法上的差異等,其轉染效果可能不同,應根據實驗室的具體條件來確定較佳轉染條件。2.確保所構建載體的質量。轉染載體的構建(細菌載體,質粒DNA,RNA,PCR產物,寡核苷酸等)也影響轉染結果。細菌載體對特定宿主細胞傳染效率較高,但不同細菌載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細胞周期,如逆轉錄細菌需侵染分裂期的宿主細胞,此外還需考慮一些安全問題(如基因污染)。除載體構建外,載體的形態及大小對轉染效率也有不...