鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法:將原代培養的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養皿(實驗組)和普通培養皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態,應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態,流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。鼠尾膠原醋酸溶解:在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。杭州鼠尾膠原平均價格
膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。膠原蛋白可分為20幾個亞型,但為常見的為I、II、III型膠原蛋白,即間質膠原蛋白。其中I型為豐富且品質優良。劃重點:任何動物的膠原都有許多共性,I型膠原蛋白為豐富且品質優良,鼠尾膠原蛋白是I型膠原蛋白。于是,動物中心就進行了有關“耗子尾汁”的發明:一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法并在說明書中給出了原因:“一般的生物體中提取的膠原蛋白多為混合型,之前多從牛皮、豬皮、牛腱中提取,但這類膠原蛋白不僅有油脂等其他雜質,天津正規鼠尾膠原供應商細胞培養器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例。
鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,真空冷凍干燥備用;(2)凍干鼠尾腱經低溫凍干粉碎至200?400目;(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL,期間不斷攪拌,防止凍結成塊,得到膠原溶脹液;(4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,鼠尾腱與蛋白酶質量比為50:I?100:1,在4°C,48?74小時酶解,期間間歇性攪拌。
以鼠尾膠原為支架的類似物的建立:探尋建立類似物的培養方法。方法:原代培養人皮膚成纖維細胞,制備鼠尾膠原,將鼠尾膠原溶液、濃縮培養基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細胞溶液在適當的比例下混合后形成凝膠構建類似物。結果:形成的類似物中成纖維細胞生長狀態良好,并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結論:①利用鼠尾膠原可以構建類似物,該模型是進行皮膚部位型培養和制作復合皮的關鍵與基礎;②成纖維細胞膠原凝膠復合物有著良好的生物學特性,它是研究成纖維細胞與細胞外基質之間以及細胞之間相互作用的良好模型。酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料,從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿。
鼠尾膠原:鼠尾膠原是一種天然培養基和一種天然的黏附劑。實驗設備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實驗內容:1、制備鼠尾膠原(兩個同學一組操作)。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養瓶內。制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘;2、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的,折斷尾骨后拉出尾腱;3、將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡;4、重復步驟2、3,直至尾腱量夠用;5、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克);6、將尾腱置于平皿內剪碎,轉移至三角燒瓶中;7、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液;8、搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期;9、離心,4000轉/分,10-15分鐘;10、吸取上清,分裝成小瓶,4℃保存。本品可用于細胞培養皿的包被,特別適合普通細胞培養器皿不易貼壁細胞的培養。徐州鼠尾膠原哪家好
除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料。杭州鼠尾膠原平均價格
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明:不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入100ul10×PBS或10×培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。杭州鼠尾膠原平均價格
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...