一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血的優點：1、本發明制作的止血材料采用溫和的冷凍干燥操作工藝不光光提高了生產效率，同時避開了使用其他設備帶來的成本上升問題。2、本發明專利生產的止血材料(止血海綿)，其動物實驗表明其具有非常好的止血效果。也可應用于內臟出血。具有廣闊的應用前景。3、本發明制備的止血材料具有可完全被人體吸收，與出血創面一接觸，其接觸面迅速形成凝膠而粘附在出血創面上，外面則形成連續的壓迫干層。啟動凝血因子。同時，聚乙烯醇為成膜材料，兩種的協同效應形成了一種理想的止血狀態和結構。鼠尾膠原醋酸溶解：在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。南京正規鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23ul10×PBS或10×培養液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養液，轉移到培養箱中培養。杭州貴陽鼠尾膠原取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘。

膠原蛋白分離提純實驗方案：提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟：1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行酶解，持續一段時間待混合物變成無色、透明、粘稠液體后即可在4℃，5000g的離心力下離心20min，收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液。2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中，持續攪拌直至白色絮狀沉淀從溶液中析出，繼續加入氯化銨直至沉淀不在析出為止，4℃，5000g的離心力下離心20min后獲得白色沉淀。沉淀物加入一定濃度的醋酸溶液中溶解。3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續反復進行鹽析處理，重復步驟2的過程2~4次。_x005f_x005f_x005f_x000c_鼠尾膠原蛋白經SDS-PAGE蛋白質電泳。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。

詳細步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2.將尾巴剪開、去掉皮毛，并剪成小段（3cm左右），抽出銀色的尾鍵；3.把剪碎的尾鍵置于150ml，0.1％消過毒的醋酸中，4℃放置，并不時振蕩；4.48h后取上清，4000轉離心30min后，取上清；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存。有時可繼續向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重復以上步驟，以制備更多的鼠尾膠。在使用時，先將冰存的膠原液在室溫下解凍，再按以下步驟包被培養器皿：1）用吸管吸取膠原液，在無菌的培養器皿的生長面內壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2）若包被的是培養瓶，可向培養瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻。讓氨氣充入瓶內后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養皿或板的話，可將培養皿或板放在已消毒的飯盒內，將浸有氨水的棉球放入飯盒內，蓋緊飯盒蓋，四周用封口膠封死。膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網，它會牢牢地留住就要流失的鈣質。

含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準備好懸浮于培養液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養液，混勻后立即加到培養器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養液，轉移到培養箱中培養。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。為了盡可能減少對動物的傷害和方便試驗人員的操作，剪下一小段鼠尾是一個不錯的選擇。鼠尾膠原生產廠家

從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。南京正規鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3．稀釋一定數量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。南京正規鼠尾膠原廠家