使用RFect系列小核酸轉染試劑做siRNA/miRNA轉染測實驗注意事項：1.細胞接種：一般做轉染前現在接種/鋪板（細胞計數大約5*10^4cell/ml），使做轉染前細胞密度在30-50%；如果細胞是原代細胞，接種密度可以密一些，細胞計數在2*10^6cell/ml；懸浮細胞可以在轉染當天接種/鋪板（細胞計數大約5*10^4cell/ml），待細胞狀態穩定后做轉染前細胞密度30-40%。2.為了能在使用時有較好的轉染效果，靠前次使用建議您用24孔板做，每孔2ul轉染試劑即可。將較佳轉染條件（siRNA與轉染試劑的用量、比例）放大到對應的孔板即可~將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉，直到管內物體完全融化。合肥南昌原代細胞分離試劑盒

原代細胞的小知識：1.解凍原代細胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中，保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶，并轉移到無菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養箱中，我們在使用cellsystems的原代視網膜內皮細胞時，復蘇的時候沒有去離心，第二天換個液就可以。2.傳代原代細胞有間隙克制接觸不良反應，所以細胞不能到達100%的密度的時候傳代，一般較有效的建議觀察細胞的生長周期，CellSystems的原代細胞在細胞密度達到85%左右的時候傳代較佳，當生長至100％匯合時，它就會衰老。記住，所有的原代細胞不是100％純，因此我們要盡量減少污染細胞的生長。當細胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶，也可以嘗試下cellsystems的整體消化套裝哦（品牌：cellsystems，貨號：4Z0-800）并在顯微鏡下密切監測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。蘇州原代細胞分離試劑盒產品介紹它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。

取材的基本要求和注意事項敘述如下：一、取材的基本要求（1）取材要注意新鮮和保鮮新鮮組織易于培養成功，取材時應盡量在4~6h內能制作成細胞，盡快入箱培養，若不能即時培養，應將組織浸泡于培養液內，于4℃存放。若組織塊較大，應在除去表面血塊、壞死組織、脂肪和結締組織后，切碎于培養液內4℃存放，但時間不能超過24h。對于已切碎的組織或血液、淋巴組織應加入含10%二甲基亞砜的培養基，按細胞凍存方式于液氮中冷凍保存。（2）取材應嚴格無菌所取標本材料應在無菌條件下進行，為了確保無菌，對所取材料若疑有污染的可能，應將所取組織在含高濃

原代細胞的獲取：酶消化法：所用試劑：膠原酶和胰酶。膠原酶的配制：建議看相關的文獻進行膠原酶的配制。小編常用的是DMEM進行配制，配制好的膠原酶消化液放置在37℃水浴鍋內預熱（注意現用現配）。胰酶（酶聯合法獲取原代細胞中會加入胰酶，相關文章也蠻多的）膠原酶消化時間：根據組織特性，消化時間會有差異。以小鼠腎細胞為例，加入膠原酶Ⅰ進行消化后，放入37℃培養箱中消化45min~1h左右，期間每10min中震蕩一次，知道組織塊幾乎完全消失為止（若是組織塊剪得非常細小，時間可以短一些，30min左右即可）。原代內皮細胞和血管平滑肌細胞都需要添加L-谷氨酰胺和成纖維細胞生長因子。

原代細胞的獲取：1.培養時間無論是酶消化法還是組織塊法，取樣后培養時間較少需要一周以上的時間，期間可換液或者傳代。2.換液時間無論酶消化法還是組織塊法，在培養期間需要隨時關注細胞的生長狀況，需觀察其是否貼壁，是否污染，組織塊法要觀察是否有細胞遷移出來。正常情況下48~72h可換液一次。3.細胞狀態判斷正常貼壁細胞在培養幾天后，會逐漸貼滿整個瓶底或者皿底，有的呈纖維狀，有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細胞圖（左：小鼠成纖維細胞；右：雞胚成纖維細胞；下：人成纖維細胞）。用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。北京原代細胞分離試劑盒推薦廠家

很適合用于藥物測試、細胞分化和轉化等實驗研究。合肥南昌原代細胞分離試劑盒

保存條件：-20℃保存，一年有效。其中臺盼藍染色液也可以4℃保存，PMSF(晶體)和PMSF(溶劑)在配制成100mMPMSF溶液前可以室溫保存。注意事項：1.試劑盒中的試劑對于不同的實驗目的不必全部使用。2.如果不是用于制備線粒體蛋白樣品，線粒體分離試劑和線粒體裂解液中不必加入PMSF。3.如果用于制備線粒體蛋白樣品，線粒體分離試劑和線粒體裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在線粒體分離試劑或線粒體裂解液加入到樣品中前4.2-3分鐘內加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。5.分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進行，所用溶液需冰浴或4℃預冷。6.通常在分離線粒體時前后兩次離心速度選取600g和11,000g，如果希望純度更高，但對線粒體的得率要求不高，前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g合肥南昌原代細胞分離試劑盒