當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而啟動靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而啟動細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。無錫正規外泌體提取試劑服務電話
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時,對離心時間極為敏感。南京正規外泌體提取試劑進貨價外泌體提純試劑盒的特色與優勢:樣本輸入量多樣。
外泌體與免疫系統:不同的細胞來源的外泌體,包括免疫細胞(B細胞和樹突狀細胞)、病細胞、上皮細胞和間充質細胞,釋放出帶有載體的外泌體,可影響先天免疫系統和適應性免疫系統中受體細胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細胞可直接或間接地受到外泌體的影響,刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾病:外泌體可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發生的發展過程中起作用。體外培養心血管疾病的細胞收集的外泌體與疾病相關的代謝適應有關;體外培養的間充質干細胞和胚胎干細胞的外泌體具有保護心血管的作用。
2015年,隨著精細醫學概念的提出,越來越多的人開始關注如何能做到疾病的精確診斷和治病。外泌體作為一個新型的研究熱點,由于它在體內存在的普遍性和獲取的便捷性,已經成為了疾病診斷治病的潛在有效方式,在精細醫學發展上有著光明的前景。多泡內體的腔內囊泡,要么分選進溶酶體將物質降解,要么作為外泌體分泌到胞外環境中。將膜分選到不同的腔內囊泡群中的機制尚不清楚。該研究發現物質被分選到內體膜上的不同子域中,并且外泌體相關結構域向內體腔的轉移不取決于ESCRT(運輸所需的內體分選復合體)的功能,但是需要鞘脂神經酰胺。純化的外體富含神經酰胺,并且在神經鞘磷脂酶被壓制后外泌體釋放減少。這些結果確定了內體內膜運輸和外泌體形成的途徑。通過離心篩選初步去除體液中的細胞成分和細胞碎片,制成體液樣本備用。
外泌體鑒定:參與生物功能的分子,如凋亡轉接基因2互作蛋白X(ALIX)、一些病癥易感基因101蛋白(TSG101)、熱休克蛋白(HSP70、HSP90),以及細胞分泌的特異性蛋白。外泌體高通量檢測。外泌體內含有與細胞來源相關的蛋白質和核酸,可以運輸蛋白質、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等進入受體細胞,參與細胞間通訊。不同細胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同,可作為多種疾病的早期診斷標記物,也能作為靶向藥物的載體進行疾病治病。高通量測序。2.mRNA高通量測序。芯片(人、小鼠)。芯片(人、小鼠)。5.蛋白質組分析(iTRAQ、TMT、Label-free)。外泌體提純試劑盒的特色與優勢:外泌體被純化并且不含任何其他RNA結合蛋白。無錫正規外泌體提取試劑直銷廠家
靜置10~15分鐘,留取沉淀物備用。無錫正規外泌體提取試劑服務電話
在無菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進行稀釋,然后通過離心篩選初步去除體液中的細胞成分和細胞碎片,制成體液樣本備用;體液樣本純化:通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾,進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質,靜置10~15分鐘,留取沉淀物備用;外泌體提取:將上述沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層,然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,置于80℃儲存備用。此提取方法條件復雜,成本高,專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來;根據外泌體表面的特異生物化學特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。無錫正規外泌體提取試劑服務電話
外泌體相關miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個核苷酸的非編碼小RNA,能夠通過下調或壓制靶mRNAs來調節轉錄水平上的基因表達,目前非編碼RNA被普遍發現存在于NSCLC患者外泌體中,參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓制性復合物與多個mRNA結合,從而阻滯整個生物通路。因此,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優勢。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環游離miRNA的表達,與75例健康者相比,發現了兩種高表達的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個mi...