具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進行，1、300×g10min，棄沉淀，去除細胞2、2000×g20min，棄沉淀，去除死細胞3、10,000×g30min，棄沉淀，去除細胞碎片等亞細胞成分4、10,000×g70min，棄上清，沉淀即為外泌體5、PBS（每10ml細胞培養(yǎng)液用30mlPBS重懸）清洗沉淀物，混勻，10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀（外泌體），立即使用或置于-80℃?zhèn)溆谩?、一般超速離心法會結合密度梯度離心，這樣得到的外泌體更純，具體做法第4步后蔗糖梯度離心，10,000×g70min，以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優(yōu)點是：成本低，操作簡單，獲得的囊泡數(shù)較多。缺點是：耗時耗力（需用時8-30h，并且每次只能處理6個樣本），獲得的外泌體純度不是很高，高速及重復離心也會對外泌體產(chǎn)生很大的傷害，并且不適用于如血漿和血清等粘性液體生物樣本。近年來，隨著人們對外泌體的研究和認識加深。成都正規(guī)外泌體提取試劑報價

大量關于一些病癥相關巨噬細胞的研究表明，一些病癥相關巨噬細胞通過與一些病癥細胞進行細胞間通訊，與一些病癥進展和轉移相關，然而對TAM與一些病癥細胞之間通信的研究限制于可溶性因子，例如促炎細胞因子，其中包括趨化因子、炎癥因子和生長因子等。較近的研究證據(jù)表明，外泌體是一些病癥微環(huán)境中不同細胞類型之間的重要通訊媒介。外泌體將信息從一個細胞傳遞到另一個細胞并重編程受體細胞。目前大部分研究都集中在一些病癥細胞分泌的外泌體，關于TAM衍生的外泌體及其對治病細胞的影響知之甚少。TAM具有兩種相反的表型：M1亞型巨噬細胞具有抗一些病癥作用，M2型巨噬細胞具有致瘤作用活性。TAM的表型由特定的一些病癥來源的趨化因子和外泌體調節(jié)。較近的一項研究表明，一些病癥來源的外泌體miRNA調節(jié)一些病癥促進M2巨噬細胞的極化。然而，TAM衍生的外泌體對一些病癥進展和轉移的調節(jié)尚未明確定義。目前，TAM的外泌體概況仍然大部分未知，并且TAM衍生的外泌體對于一些病癥進展在功能上是否必需還未確定。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家重復離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質量。

CD47是信號調節(jié)蛋白α（SIRPα，也稱為CD172a）的配體，CD47-SIRPα間的結合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號，從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖，增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用，但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn)，CD47和病基因KRAS驅動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理，并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性。所以，外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。

外泌體在肺病進程中的作用：肺病細胞來源外泌體（LCC-exosome）可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進一些病癥的生長。據(jù)相關報道稱，LCC-exosome中的miR-210可以通過調節(jié)基質細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量，促進一些病癥血管的生成；而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，外泌體中的內容物可以觸發(fā)上皮-間質轉化（EMT）。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加，促使人正常支氣管上皮細胞出現(xiàn)EMT，從而使肺支氣管正常上皮細胞出現(xiàn)增殖，遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍。外泌體提取：較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑。

外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時。合肥正規(guī)外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體的提取分離：PEG-base沉淀法。成都正規(guī)外泌體提取試劑報價

外泌體與神經(jīng)退行性疾病：外泌體可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn)。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein，ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷（應用潛能）：外泌體生成機制表明，通過分析外泌體的組分，可以幫助識別其來源的細胞類型。這一特性已被應用于開發(fā)心血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法，也在肝腎肺相關疾病中進行研發(fā)測試。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮，使外泌體懸浮于液體上層。成都正規(guī)外泌體提取試劑報價