外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發的外泌體快速提取試劑盒,組分經過優化處理,適用于細胞培養上清液、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。2.當血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。外泌體提純試劑盒的特色與優勢:無需沉淀試劑,也無需過夜培養。南京正規外泌體提取試劑廠家批發價
外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據,表明PS法可提取相當高純度的外泌體。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。南京正規外泌體提取試劑生產廠家近年來,隨著人們對外泌體的研究和認識加深。
外泌體與肺病預后:外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現,NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA,其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調,進一步研究發現,let-7f和miR-30e-3p水平可以區分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預后密切相關。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規化應用的關鍵。
外泌體研究的主要應用:外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥。一些病癥轉移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血病(AML)細胞的增殖、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉移過程。免疫。β細胞將含有蛋白質和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉移到其他代謝部位或免疫內皮細胞,有利于維持葡萄糖體內平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉移到內皮細胞導致了內皮細胞的損傷促進動脈硬化。分子標記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發現循環EVs的水平上升。預后標志。外泌體提取:超濾膜也可用于分離外泌體。
研究初次發現瘧原蟲傳染小鼠血漿外泌體(exosomes)能夠壓制一些病癥血管生成,并初步闡明其分子機制。研究加深了對瘧原蟲傳染宿主所分泌的外泌體與一些病癥血管生成之間的相互作用的認識,為開發瘧原蟲傳染來源的外泌體作為一種新型抗一些病癥制劑奠定了基礎。研究人員選用肺病小鼠模型作為研究對象,從傳染瘧原蟲的小鼠血漿中獲得外泌體,并將這些外泌體注射到小鼠的一些病癥內部,并與沒有瘧原蟲傳染的小鼠血漿外泌體進行對照。研究發現,瘧原蟲傳染小鼠的血漿外泌體明顯壓制一些病癥血管的生成。進一步的研究發現,瘧原蟲傳染的小鼠血漿外泌體通過至少四種特殊的微小RNA(miR16-5p/17-5p/322-5p/497-5p)壓制血管內皮細胞VEGF受體(VEGFR2)的表達從而阻斷血管生成的信號通路。這些發現加深了人們對瘧原蟲抗病機理的理解,并為瘧原蟲療法治病一些疾病的臨床研究提供進一步的理論依據。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣。南京正規外泌體提取試劑生產廠家
外泌體提取:使用抗體包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌體。南京正規外泌體提取試劑廠家批發價
外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細胞質蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結合蛋白(Annexins);南京正規外泌體提取試劑廠家批發價
外泌體提取:1、過濾。超濾膜也可用于分離外泌體。根據外泌體的大小,從蛋白質和其他大分子中分離外泌體。較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑,可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體,也有設計成微柱多孔硅纖毛結構以分離40-100nm外泌體:不過,該方法由于過濾膜的粘附,可能會損失外泌體,并且過濾時的壓力和剪切力,可能會使外泌體變形受損。2、基于聚合物的沉淀技術。基于聚合物的沉淀技術通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合,在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。用這種聚合物沉淀具有許多優點,包括對分離的外泌體影響小、pH...