外泌體的提取方法:1、色譜法。色譜法是利用根據凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關系而對溶質進行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進入凝膠孔,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先被流動相洗脫出來;小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強地滯留,更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。2、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認識加深。金華外泌體提取試劑直銷價
外泌體的提取、分離方法:梯度密度離心法。研究發現,外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結合,原理是先除去非囊泡物質,再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,污染物質可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬。昆明正規外泌體提取試劑廠家一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標。
外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。現已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞、間充質干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。
外泌體相關蛋白質與肺病的診斷:近年來眾多文獻報道,肺病細胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質并促進肺病的發生的發展,是早期診斷肺病的有效途徑。有研究發現,NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%,而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%,因而認為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數據庫分析發現153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質,進一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導途徑以促進一些病癥的發生的發展,因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學標記物。近幾年來,市場上已出現各種商業化的外泌體提取試劑盒。外泌體提取:可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體。
研究中研究人員發現,胃病細胞周圍富含TAM。TAM以M2極化表型為特征,并促進胃病細胞在體外和體內的遷移。此外,研究人員發現M2衍生的外泌體決定了TAMs介導的遷移活動。通過使用質譜方法,研究人員確定載脂蛋白E(ApoE)是M2巨噬細胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質,是決定胃病細胞遷移潛力的主要驅動因素。然而,來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細胞的外泌體在體外和體內對胃病細胞的遷移沒有顯著影響。在機制上,M2巨噬細胞衍生的外泌體介導ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,并在TAM和受體胃病細胞之間進行細胞間轉移,促進細胞骨架的遷移。總的來說,該研究發現外泌體介導的功能性ApoE蛋白從TAM轉移到一些病癥細胞,促進了胃病細胞的遷移。外泌體在免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。廣州正規外泌體提取試劑直銷價
所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。金華外泌體提取試劑直銷價
外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲。功能:當外泌體在1980年初次被發現后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發現外泌體具有多種多樣的功能。金華外泌體提取試劑直銷價
所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。1983年,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發現,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規...