影響轉染試驗的因素:1.轉染試劑跟細胞系不匹配轉染試劑跟細胞系也是講究配合默契的,使用同一種試劑,不同細胞系轉染效率通常不同。但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要,因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然,較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。因為有些細胞系是不穩定的,可能隨著培養時間的改變,培養條件的不同,不同的選擇壓力,可能引起不同的克隆選擇。因此就算是同一個細胞系,在不同條件下轉染能力的差異可能會很大。細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。唐山正規細胞高效轉染試劑生產廠家
轉染的注意事項:培養基中的物品物品,比如青霉素和鏈霉素,是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。所以,在轉染培養基中不能使用物品,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染,不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素,因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。成都正規細胞高效轉染試劑廠家推薦其可降解性對體內應用也具有重要的意義。
如何有效提高細胞轉染實驗效率:1.選擇合適的轉染試劑不同細胞系轉染效率通常不同,但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要,因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然,較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。2.保持較佳的細胞狀態一般低的細胞代數(<50)能確?;蛐筒蛔?。較適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到指數生長期的細胞,細胞生長旺盛,較容易轉染。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變,總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株,在各實驗室不同培養條件下,其生物學性狀發生不同程度的改變,導致其轉染特性也發生變化。因此,如果發現轉染效率降低,可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。
細胞電轉染實驗的幾點建議:1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉染實驗非常重要,電場強度不能過高,過高會增加細胞的死亡率;也不能過低,過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值,實驗前應測定所轉染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態要好用于電轉的細胞一般選取處于對數生長期的細胞(15代以內,傳代后2d)。因為處于對數生長期的細胞分裂旺盛,表面結構致密比穩定期的細胞差,電轉后,細胞膜的恢復能力強,而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA.來指示細胞中目標基因是否存在,這樣的報告基因一般可以在轉染后一兩天內檢測到。
細胞轉染實驗簡介:實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法:電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和細菌介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;細菌法是利用包裝了外源基因的細菌傳染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;細菌法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現在對于很多普通細胞系,一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法~蛋白表達和培養基的選擇哺乳動物細胞系合成可溶的。重慶正規細胞高效轉染試劑廠家現貨
總染色體重組或基因調控變化等而演化。唐山正規細胞高效轉染試劑生產廠家
轉染的注意事項:有血清時的轉染血清一度曾被認為會降低轉染效率,但只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清,在轉染過程中是可以使用血清的。轉染過程在兩步中需要使用培養基做為稀釋液:在DNA-陽離子脂質體復合物準備過程以及復合物同細胞接觸過程。在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養基,因為血清會影響復合物的形成。但在復合物形成后,在加入細胞中前可以加入血清。陽離子脂質體和DNA的較佳量在使用血清時會有所不同,因此如果你想在轉染培養基中加入血清需要對條件進行優化。大部分細胞可以在無血清培養基中幾個小時內保持健康。對于對血清缺乏比較敏感的細胞,可以使用一些營養豐富的無血清培養基,或者在轉染培養基中使用血清。唐山正規細胞高效轉染試劑生產廠家
如何有效提高細胞轉染實驗效率:1.選擇高效的轉染方法不同轉染試劑有不同的轉染方法,但大多大同小異。轉染時應跟據具體轉染試劑推薦的方法,但也要注意,因不同實驗室培養的細胞性質不同,質粒定量差異,操作手法上的差異等,其轉染效果可能不同,應根據實驗室的具體條件來確定較佳轉染條件。2.確保所構建載體的質量。轉染載體的構建(細菌載體,質粒DNA,RNA,PCR產物,寡核苷酸等)也影響轉染結果。細菌載體對特定宿主細胞傳染效率較高,但不同細菌載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細胞周期,如逆轉錄細菌需侵染分裂期的宿主細胞,此外還需考慮一些安全問題(如基因污染)。除載體構建外,載體的形態及大小對轉染效率也有不...