眾所周知,RNA提取是一項困難的工作。常見的挑戰包括RNA降解、低產率和/或純度以及DNA污染。此外,不同的樣品類型有自己獨特的特性,需要特別注意。例如,微生物(如革蘭氏陽性/陰性細菌、菌類、古生菌等)的細胞壁堅硬,不易被化學和酶解。其他樣本類型,如糞便和植物含有壓制劑(如多酚類、腐殖酸/黃腐酸、單寧酸等),可與RNA共沉淀,并可壓制下游分析,如RT-qPCR。RNA是不穩定的,極易降解。許多樣品含有高水平的RNase,會快速降解RNA。為了使之較小化,較好在采集時穩定樣本中的RNA。常用的樣品穩定方法包括液氮快速冷凍、干冰乙醇浴或-80°C冷凍室。然而,這些方法也有缺點,如核酸的凍融損傷,并不是所有的研究人員在采集樣品時都能立即使用這些方法。在實際RNA提取中,有幾個提取原則:保證RNA一級結構的完整性。杭州RNA提取試劑報價
植物RNA提取:植物組織中,富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級代謝產物,或RNase的活性較高。這些物質在細胞裂解后與RNA緊密結合形成難溶復合物或者膠狀沉淀,很難將其去除。所以我們在提取植物組織時,要選取針對植物的試劑盒,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨,研磨過程中液氮要及時補充,避免樣品融化,研磨后的樣品應迅速加入裂解液中震蕩混勻,避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,則應適當減少提取用量,否則組織研磨及裂解不徹底,會使提取的RNA產量較低。3、含水分較多的植物組織例如石榴果實、西瓜果實、桃子果實等則應當適當提高樣本量(可選100~200mg)。4、植物組織,如植物葉片、根莖、堅硬的果實等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,再繼續進行提取步驟。常規的組織勻漿機對植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用。開封正規RNA提取試劑廠家直銷總RNA提取試劑:試劑中含有酚等有害物質,注意個人防護。
環狀RNA是一類產生于RNA剪切過程中的封閉喚醒RNA分子,主要由外顯子和(或)內含子構成。環狀RNA參與了復雜的RNA-RNA的相互作用網絡,在基因轉錄后調控中發揮作用;環狀RNA可直接與蛋白質結合,也可通過RNA介導間接與蛋白質發生關聯,影響蛋白質功能;部分環狀RNA具有翻譯功能。研究發現,環狀RNA與一些疾病的發生、發展具有直接關聯,為一些疾病發病機制提供了新思路,除此之外,環狀RNA在與衰老、炎癥等生理、病理現象方面也有重大應用。
酵母RNA的提取方法:濃鹽法。酵母菌外層是厚達1.2μm的細胞壁,其化學成分是葡聚糖(30-40%)和甘露聚糖(30%),此外,脂類8.5-13.5%,蛋白質6-8%,還含有幾丁質,酵母菌的葡聚糖,分子是為240000道爾頓,是一種分枝聚合物,葡聚糖與甘露糖之間由蛋白質維系起來。近10%的甘露聚糖的側鏈通過磷酸二酯鍵與磷酸邊接,所有這些連接方式都使得酵母提取物首要的也是關鍵的是如何破壞細胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多種方法,而用高濃度鹽溶液處理,同時加熱,以改變細胞的通透性,就可以使核酸從細胞內釋放出來。由于RNA鈉鹽易溶于水,在含鹽的菌體溶液中,RNA有較高的溶解度,這樣,通過控制溫度使蛋白質變性沉淀,通過離心將RNA及蛋白質和脫核酵母菌體分離,從而達到提取之目的。其中食鹽起到自溶促進劑,以及防腐與脫臭的作用。tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉運者。
RNA指的是核糖核酸。真核生物體的遺傳物質存在于細胞核內,多數的真核生物使用DNA也就是脫氧核糖核酸來作為遺傳的中心物質,但是少量的病菌遺傳物質可以是RNA。正因為病菌的遺傳物質是RNA,所以可以通過檢測病菌的RNA是否存在,或者其濃度和含量來判斷是否存在相應的病菌傳染,傳染的程度及病菌是否仍在大量復制。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤、G鳥嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶,其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。RNA是核糖核酸的縮寫。存在于生物細胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。專門的高鹽緩沖系統允許RNA物質基團結合到旋轉柱的玻璃纖維基質上,同時使污染物通過柱被有效地洗去。血漿/血清RNA提取試劑盒:高效去除植物組織中的色素、酚類等雜質,提取RNA的純度高,產量大。開封正規RNA提取試劑廠家直銷
細菌總RNA提取試劑盒:本試劑盒可以快速從細菌體內提取總RNA。杭州RNA提取試劑報價
rRNA是細胞內的一種基本RNA,與r蛋白一起構成蛋白質合成的場所—核糖體。隨著rRNA基因序列越來越了解,其在生物研究中也的得到了更普遍的應用,主要表現在生物進化研究和分子流行病研究。(1)rRNA在生物進化上的研究。rRNA具有高度保守性,且普遍存在于各種生物中,rRNA提供了足夠的序列信息。現在還可用于在細菌分類、細菌鑒定等方面。(2)rRNA在分子流行病上的研究。目前,人們已經把rRNA在進化上的普遍差異應用到了流行病學研究方面,通過對不同細菌進行鑒定分類,從而明確病因,追蹤傳染源,進一步控制及預防疾病。杭州RNA提取試劑報價
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...