外泌體(exosomes)是活細(xì)胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個(gè)外泌體,大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用外泌體提取:使用抗體包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌體。外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體因諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)而被眾人知曉,也因其作為生命信息傳遞者,在體液中普遍存在及易獲得性等特點(diǎn)被譽(yù)為液體活檢"新貴",成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點(diǎn),尤其是在一些病癥研究領(lǐng)域[。外泌體作為細(xì)胞間通信載體的作用現(xiàn)在已被普遍接受。外泌體包含胞質(zhì)環(huán)境中富含的DNA,RNA,蛋白質(zhì)和其它分析物,研究表明,外泌體中的運(yùn)轉(zhuǎn)RNA和蛋白質(zhì)與一些病癥的生長(zhǎng)密切相關(guān),有望作為診斷標(biāo)志物。研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個(gè)外泌體的重要調(diào)控因子,與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系,Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān)。通過microRNA高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA,與肝病的發(fā)生密切相關(guān)。金華正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)外泌體提取:高速離心沉淀外泌體。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),量少。、
外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡(jiǎn)述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細(xì)菌,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。
人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí),外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,進(jìn)而啟動(dòng)靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,從而啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體的提取方法:密度梯度離心。外泌體提取試劑報(bào)價(jià)
直接把外泌體從尿液中沉降下來,無(wú)須分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基。外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體提取:尺寸排阻色譜。尺寸排阻色譜(Size-exclusionchromatography,SEC)是基于大小而非分子量實(shí)現(xiàn)分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子,分子根據(jù)其直徑通過微球,半徑小的分子需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能通過色譜柱的孔隙遷移,而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。此外,可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法。與離心方法相比,色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢(shì),因?yàn)橥ㄟ^色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,這可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu)。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù)。不過,該方法耗時(shí)較長(zhǎng),不適合大量樣本處理外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達(dá),目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,參與一些病癥的形成和演化過程。單個(gè)miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個(gè)mRNA結(jié)合,從而阻滯整個(gè)生物通路。因此,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì)。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報(bào)道了循環(huán)游離miRNA的表達(dá),與75例健康者相比,發(fā)現(xiàn)了兩種高表達(dá)的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等對(duì)27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個(gè)mi...