鼠尾膠原膠凝程序：膠原蛋白I按以下步驟使其pH達到堿性時凝膠。1）將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和，把蓋子放在150mm的培養皿上，暫放置一邊。2）將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上，厚度可以根據需要改變，膠原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的蓋玻片。對于直徑100mm的培養皿，每個加入約6mL;對于60mm培養皿添加約2.3mL，對于35mm培養皿添加約1mL。3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養皿轉移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4）在無菌蒸餾水中（35mm培養皿加5mL，60mm培養皿加10mL等）浸泡涂布的蓋玻片或培養皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水，放置在層流罩中過夜。5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。鼠尾膠原醋酸溶解：在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。珠海正規鼠尾膠原生產廠家

鼠尾膠原：1實驗制備：實驗設備及材料：大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實驗內容：1、制備鼠尾膠原（兩個同學一組操作）。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養瓶內。實驗步驟：制備鼠尾膠原：1、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘；2、手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱；3、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡；4、重復步驟2、3，直至尾腱量夠用；5、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）。南昌正規鼠尾膠原報價將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡。

鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結合的工藝，保持恒低溫無菌的環境，利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中，進行多次真空冷凍干燥，并經進一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫用材料，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結構。

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈，用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開，去掉皮毛，并剪成小段，抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃，將肌鍵分散于醋酸溶液中，4℃放置一周，然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4℃保存。成功建立了利用自制鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。

含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準備好懸浮于培養液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養液，混勻后立即加到培養器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養液，轉移到培養箱中培養。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上， pH 左右時可形成具有一定強度三維膠。昆明正規鼠尾膠原廠家現貨

鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式的成功建立。珠海正規鼠尾膠原生產廠家

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