膠原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解,水解條件溫和,反應速率快,提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結構,蛋白純度高,理化性質穩定,且無環境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復合酶。工藝可選擇一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者堿進行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預處理革屑,然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白,探討了酶和酶的加入量對提取結果的影響,給出了酶對膠原提取較佳工藝配比,酶與牛腱的質量比為0.1時效果較佳,而使用無花果蛋白酶時,0.01的配比較佳。制備鼠尾膠原:搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期。蘇州鼠尾膠原推薦廠家
一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結合的工藝,保持恒低溫無菌的環境,利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心,簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中,進行多次真空冷凍干燥,并經進一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉;較后由滅菌、無菌包裝,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上。本發明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產率和生物相容性,降低了成本,適用于生物醫用材料。溫州正規鼠尾膠原直銷價一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結合的工藝。
具體實施方式實施例1止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯合發揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為0.2%0.2%。余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養小板,-40°C預凍池,再轉入_80°C超低溫冰箱急凍4h,再轉入真空冷凍干燥機中將復合材料在-4°C下冷凍干燥10h,即可以得到復合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌,干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血。實施例2止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯合發揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為5%2%1%,余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養板,-20°C預凍,再轉入_80°C超低溫冰箱急凍8h,再轉入真空冷凍干燥機中將復合材料在-4°C下冷凍干燥30h,即可以得到復合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌,干燥保存。
鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,去掉皮毛,并剪成小段,抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,將肌鍵置于平皿中剪碎,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,將肌鍵分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。利用鼠尾膠原可以構建類似物,該模型是進行皮膚部位型培養和制作復合皮的關鍵與基礎。
膠原蛋白分離提純實驗方案:提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟:1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行酶解,持續一段時間待混合物變成無色、透明、粘稠液體后即可在4℃,5000g的離心力下離心20min,收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液。2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,持續攪拌直至白色絮狀沉淀從溶液中析出,繼續加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,4℃,5000g的離心力下離心20min后獲得白色沉淀。沉淀物加入一定濃度的醋酸溶液中溶解。3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續反復進行鹽析處理,重復步驟2的過程2~4次。_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x000c_鼠尾膠原蛋白經SDS-PAGE蛋白質電泳。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質。貴陽正規鼠尾膠原哪家好
鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便。蘇州鼠尾膠原推薦廠家
膠原的立體結構與一般的球狀蛋白質完全不同,每一條亞基形成一股左手旋轉的螺旋,其中每3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,這些棒狀分子首尾相連,并側向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數千埃)。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區,這些極性區能和重金屬離子結合,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結構。蘇州鼠尾膠原推薦廠家
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...