細胞轉染的常用方法：細菌轉染：原理：對于用脂質體不能實現轉染的細胞，可以采用細菌轉染。可用于蛋白質過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉染細胞、原代細胞的穩定性轉染。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌→采用非細菌法轉染包裝細胞系，擴增并分離得到重組細菌顆粒→純化并滴定細菌液→轉導目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養物中的細菌，并加入新鮮培養基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。瞬時轉染的細胞中，外源基因得以表達但它們并不會整合到細胞的基因組中。蕪湖細胞高效轉染試劑哪家好

細胞轉染的注意事項：1.細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。因轉染試劑對細胞有毒害作用，細胞太少，容易死。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml，確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。細胞的融合度必須要達到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數細胞類型中可以獲得高表達活性。同其他啟動子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細菌)相比，在BHK-21中其活性較高。這三種細菌啟動子在T細胞來源的細胞系，如Jurkat中組成表達水平較低。長沙正規細胞高效轉染試劑廠家直銷重新接種于培養皿或瓶，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。

轉染的注意事項：用于蛋白生產的細胞的轉染可以在添加有血清或無血清培養基中進行。但更傾向于使用無血清培養基表達蛋白，因為血清蛋白會干擾下游表達蛋白的純化。無血清培養基一般針對某一特定細胞類型優化并有幾類無血清培養基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養基低得多）。無蛋白培養基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學成分的培養基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應用的一種。在含血清時轉染的細胞可以適應無血清培養基，無蛋白培養基或限定化學成分的培養基。在部分情況下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），對于已適應無血清或無蛋白培養基的細胞，可以使用其培養基進行轉染。其他一些無血清培養基包含克制陰離子脂質體介導轉染的成分，在這些情況下，有必要在諸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培養基中進行培養和轉染

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉染整整半年，百思不得其解。較后發現，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據我的經驗，盡量使用開封半年內的，因為過了半年后，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加，而轉染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈。2.未加血清轉染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養基。根據毛博的經驗，其實也可以在原來的無血清培養基里面滴加血清。這個時候，較好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清。過早的話，會引起未轉染的細胞瘋狂生長。轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。

轉染的注意事項：培養基中的物品物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。對于貼壁細胞，一般要求在轉染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液。重慶正規細胞高效轉染試劑廠家批發價

能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內。蕪湖細胞高效轉染試劑哪家好

細胞轉染實驗簡介：實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和細菌介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;細菌法是利用包裝了外源基因的細菌傳染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;細菌法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現在對于很多普通細胞系，一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法。蕪湖細胞高效轉染試劑哪家好