細胞轉染，你至少要掌握以下幾點：主要有下面幾種方法：：化學法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體法；物理法：電穿孔法、顯微注射法、顆粒傳遞法；細菌介導法：逆轉錄細菌、腺細菌A.陽離子脂質體法：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。特點：簡單通用，適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清，轉染效率隨細胞類型變化大。由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞，所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。B.電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾，使其形成利于核酸進入的微孔。轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。太原細胞高效轉染試劑直銷廠家

如何高效率實現細胞轉染：DNA轉染導入細胞胞漿內的DNA不能穿過細胞核的核膜（"核屏障"）。在細胞有絲分裂過程中核膜溶解，DNA進入細胞核才有可能。為此，細胞處于分裂期對DNA轉染是至關重要的，并且處于分裂期的細胞比例必須盡可能大才能實現高效轉染。DNA轉染機制示意圖如下所示：轉染RNA(siRNA/miRNA/mRNA)對于RNA轉染是沒有"核屏障"的，因為RNA不需要進入細胞核發揮其生物學效應，因此細胞分裂對它沒有影響。轉染試劑的選擇理想的轉染試劑選擇可以使您的實驗如虎添翼！真核細胞的先天免疫系統，使它們能夠檢測外來物質如脂多糖、細菌或細菌核酸和蛋白質，并克制潛在病原體的入侵。此外，細胞通過信使分子向臨近細胞傳遞發現有害物質的信號。因此，這些臨近細胞甚至無需接觸病原體即可采取防御方式。這種細胞先天免疫系統也是轉染成功的一個障礙。石家莊細胞高效轉染試劑生產廠家這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。

轉染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明，對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異~

細胞轉染實驗的方法有哪些：1..電穿孔法。通過短暫的高電場電脈沖處理細胞，沿細胞膜的電壓差異會導致細胞膜的暫時穿孔。DNA被認為是穿過孔擴散到細胞內的。電脈沖和場強的優化對于成功的轉染非常重要，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞。理論上說電穿孔法可用于各種細胞，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉儀。此法每次轉染需要更多的細胞和DNA，因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉的條件都需要進行多次優化。2.細菌介導的傳染。傳染需要將目的基因克隆到特定的細菌體系中，經過包裝細胞的包裝得到改造后的細菌，再進行傳染。瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。

細胞轉染操作方法：轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，細菌轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。有血清時的轉染 血清一度曾被認為會降低轉染效率。石家莊正規細胞高效轉染試劑供應商

對于真核生物，轉染就是原核生物中轉化的同義詞。太原細胞高效轉染試劑直銷廠家

細胞轉染的原理、操作步驟以及小技巧：脂質體轉染操作步驟：(1)細胞培養：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養液，37℃CO2培養密度至40%~60%，密度過大，轉染后不利篩選細胞。(2)轉染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉染每一個孔細胞所用的量)A液：用不含血清培養基稀釋1ug質粒DNA。B液：用不含血清培養基稀釋2ul脂質體。分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。(3)吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。(4)轉染準備：用1mL不含血清培養液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養液。(5)轉染：把A/B復合物緩緩加入培養液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉染液，換入正常培養液繼續培養。(6)瞬時轉染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。太原細胞高效轉染試劑直銷廠家