目前,主流的RNA提取方法有Trizol法、離心柱法和磁珠法。其中,Trizol法與離心柱法相比,提取效果相當,但因其對操作者帶來的毒性,現在越來越被棄用。磁珠法可以針對大批量樣本處理,適合機器自動化提取,但是提取核酸純度低,提取得率低,且使用成本較高。對于拭子RNA含量較低的樣本或比較珍貴的樣本或樣本總數不是很多的實驗室,選擇的拭子RNA提取方法應是離心柱法。近來,隨著基因診斷技術的發展,從口腔拭子、泌尿生殖道拭子、痰液等樣本中進行RNA提取的試劑盒的應用價值越來越大,如tumour早期診斷、遺傳病檢測和病原體傳染核酸檢測等。拭子RNA提取效果在很大程度上取決于采樣質量、試劑盒性能等,特別是試劑盒的性能較大影響了拭子核酸的基因檢測和各種研究的開展。普通的提取實驗用國產的試劑盒就足以,價格不高,基本上各地均有現貨。金華正規RNA提取試劑服務電話
DNA和RNA的鑒別染色:利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定,非固定細胞核酸,或作溶酶體的一種標記。觀察死亡細胞熒光變色性變化以及區別分裂細胞和靜止細胞群體。雖然測定DNA和RNA含量時較難獲得好的重復性結果,但該方法已被許多實驗室普遍采用。RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區別:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇來沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來沉淀RNA。貴陽正規RNA提取試劑價格植物RNA提取試劑產品特點:操作安全可靠,無需酚抽提。
RNA組成結構:RNA和DNA一樣,也是由各種核苷酸通過3′,5′-磷酸二酯鍵連接構成的多核苷酸鏈,但與DNA有一系列差異。1.在化學組成方面,RNA含核糖而不含脫氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是,每個tNA分子含有一個胸腺嘧啶,這是在RNA鏈合成后由尿嘧啶甲基化生的,此外,前面已提到,少數DNA含有少量核糖,但這些個別的例外并不能以此否定兩類核酸組成上的差異。2.RNA一級結構的概念雖與DNA相同.但其基本結構單位是核糖核苷酸而不是脫氧核糖核苷酸。此外,部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列,而且RNA一級結構中沒有DNA那樣復雜的順序組織。3.絕大多數RNA為單鏈分子,單鏈可自身折迭形成發夾(hairpin)樣結構而有局部雙螺旋結構的特征,這是各種RAN空間結構的共同特征。RNA局部雙螺旋結構中堿基互補配對規律是A對U和G對C。由于RNA分子內部不能較全形成堿基配對,故其堿基克分子比A不等于U,G不等于C,不存在DNA堿基比例的Chargaff規律。
RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區別:紫外吸收:核酸的λm=260nm,堿基展開程度越大,紫外吸收就越厲害。當A=1時,DNA:50ug/ml,RNA和單鏈DNA:40ug/ml,寡核苷酸:20ug/ml。用A260/A280還可來表示核酸的純度。沉降速度:對于拓撲異構體(核苷酸數目相同的核酸),其沉降速度從達到小依次為:RNA;超螺旋DNA>解鏈環狀DNA;松弛環狀DNA;線形DNA也就是在離心管中較上層是線形DNA,較下面是RNA。電泳:核苷酸、核酸均可以進行電泳,泳動速度主要由分子大小來決定,因此,電泳是測定核酸分子量的好方法。DNA分子量測定較直接的方法:用適當濃度的EB(溴嘧啶)染色DNA,可以將其他形式的DNA變成線形DNA,用電鏡測出其長度,按B-DNA模型算出bp數,根據核苷酸的平均分子量就可計算出DNA的分子量。RNA定量方法與DNA定量相似。
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:RNA完整性的電泳檢測:如果需要做Northern雜交,強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳,因為非變性膠不能分離所有的RNA分子。注意:大部分昆蟲的28SRNA被切割成兩個小的片段,彼此用氫鍵相連,所以在甲醛變性膠中,沒有28S帶出現。RNA產量產率測定:將5~10μLRNA溶于TE緩沖液中(pH7.5~8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL),進而計算出RNA的產量(濃度X體積)和產率(RNA產量/組織用量)。RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8~2.1之間(具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質污染,但一般不影響RT-PCR等反應。細菌總RNA提取試劑盒:本試劑盒可以快速從細菌體內提取總RNA。南京RNA提取試劑直銷價
總RNA提取試劑,適用于動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提,可有效防止RNA在提取過程中的降解。金華正規RNA提取試劑服務電話
RNA提取濃度不高或質量不佳原因及解決辦法:1、得率過低:提取樣本過低總量不足或者提取樣本過多裂解不徹底;應當使用適當質量的組織或細胞進行提取,樣本前處理一定要做好,裂解應充分。2、基因組殘留:Trizol法提取時,分層后吸取上清時吸到中間層會帶來嚴重的基因組污染;分層吸取時應當格外小心,不要吸取到中間層。如果是采用柱式法提取,可選擇含有DNaseI的試劑盒進行提取,吸附在膜上的核酸直接用DNaseI進行消化,可極大限度的降低DNA殘留。金華正規RNA提取試劑服務電話
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...