在使用預(yù)裝培養(yǎng)基時,裝有培養(yǎng)基的容器需要以適當(dāng)?shù)臏囟却鎯Γ灰獙⑵浔┞对陉柟庀禄蛟诟邷丨h(huán)境中存儲。因為溫度過高會致使培養(yǎng)基變質(zhì),影響實驗效果。而溫度過低則會導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢,也會影響實驗效果。因此在使用前需要查看培養(yǎng)基的理想存儲條件,進(jìn)行妥善的保存。當(dāng)使用預(yù)裝培養(yǎng)基時,需要進(jìn)行無菌操作。先用手或棉花球蘸上醫(yī)用酒精、經(jīng)冷卻壓縮器或火燒消毒的鐵鉆區(qū)外部表面消毒,再取樣放入容器或燒杯中。在轉(zhuǎn)移前,需要仔細(xì)消毒取樣的容器或燒杯,以保證懸浮在空氣中的細(xì)菌和病毒不會在樣品中繁殖,造成別樣的影響。干粉培養(yǎng)基的制備需要遵循嚴(yán)格的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)和生物安全操作指南,以確保培養(yǎng)基的純度和無菌性。1%氯化鈉堿性蛋白胨水
培養(yǎng)基的pH值對微生物的生長和繁殖有著重要的影響,因此有時候培養(yǎng)基會按照pH值的范圍進(jìn)行分類。中性培養(yǎng)基的pH值約為7.4,這種培養(yǎng)基適合于大多數(shù)微生物的生長繁殖,例如生長基(Nutrient Agar)就是一種中性培養(yǎng)基。酸性培養(yǎng)基的pH值在5.5到6.5之間,適用于某些菌株,如乳酸桿菌、酸性乳桿菌等。堿性培養(yǎng)基的pH值超過7.0,是為了培養(yǎng)生長于高pH環(huán)境的微生物,例如氫氧化物耐受乙酸桿菌等。預(yù)裝培養(yǎng)基還可以根據(jù)其使用目的進(jìn)一步分類。細(xì)菌富集培養(yǎng)基:細(xì)菌富集培養(yǎng)基的目的是收集低濃度的微生物,通常在自然樣品中存在非常少量的微生物,因此必須富集到足夠的量,才能進(jìn)行接下來的試驗。這種培養(yǎng)基通常添加有各種營養(yǎng)物質(zhì),以刺激微生物的生長。M9低鹽培養(yǎng)基(5倍濃縮)制備培養(yǎng)基需要精確控制培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分以滿足微生物對不同營養(yǎng)成分的需求。
培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時微生物才能生長良好,營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時則可能對微生物生長起抑制作用,例如高濃度糖類物質(zhì)、無機鹽、重金屬離子等不只不能維持和促進(jìn)微生物的生長,反而起到抑菌或殺菌作用。另外,培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產(chǎn)物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。嚴(yán)格地講,碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值,有時也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。例如,在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過程中,培養(yǎng)基碳氮比為4/1時,菌體大量繁殖,谷氨酸積累少;當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3/1時,菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產(chǎn)量則大量增加。再如,在維生素發(fā)酵生產(chǎn)過程中,可以通過控制培養(yǎng)基中碳源與遲效氮(或碳)源之間的比例來控制菌體生長與維生素的合成協(xié)調(diào)。
在保存干粉培養(yǎng)基時還需要注意以下注意事項:盡可能縮減干粉培養(yǎng)基長時間不間斷存儲。因為長時間不使用,尤其是室溫下,會受到光照、濕度等自然環(huán)境的影響,溫濕度波動,會產(chǎn)生不穩(wěn)定的物理與化學(xué)效應(yīng),導(dǎo)致化學(xué)反應(yīng)發(fā)生,細(xì)菌及其他微生物生長。在保存時使用密封包裝進(jìn)行,使其隔絕空氣和水分及其他微生物的進(jìn)入。及時檢查干粉培養(yǎng)基的保質(zhì)期,避免超過保質(zhì)期的使用,影響實驗結(jié)果。準(zhǔn)確記錄干粉培養(yǎng)基的配方,標(biāo)簽上應(yīng)說明干粉培養(yǎng)基的名稱、生產(chǎn)日期、有效期,混合使用指導(dǎo),以方便日后使用。某些培養(yǎng)基會在特定環(huán)境下產(chǎn)生特定的表型變化,例如MacConkey培養(yǎng)基生成紅色菌落表示腸道桿菌的存在。
干粉培養(yǎng)基的組成:干粉培養(yǎng)基通常由基礎(chǔ)草料、營養(yǎng)(或培養(yǎng))成分、緩沖劑、指示劑、氨基酸、維生素和其他有機化合物等組成。具體成分的選擇和比例取決于所需培養(yǎng)的微生物類型和生長條件。基礎(chǔ)草料通常由各種蛋白質(zhì)來源(如動物肌肉、黃豆、酵母等)組成,提供微生物生長所需的碳、氮、磷、硫、鎂、鐵等元素。營養(yǎng)(或培養(yǎng))成分則包括轉(zhuǎn)化碳源、氮源、磷酸鹽、微量元素等,是培養(yǎng)基的主要能量源和合成原料。緩沖劑用于維持培養(yǎng)基的 pH 值穩(wěn)定,適當(dāng)?shù)?pH 值對于微生物生長和代謝至關(guān)重要。指示劑常用于檢測微生物在培養(yǎng)基中的生長和代謝情況,如酚紅、溴藍(lán)、氧化亞鐵等。氨基酸和維生素等是微生物在生長過程中所需的營養(yǎng)物質(zhì),能夠促進(jìn)微生物的代謝和生長。制備培養(yǎng)基需要考慮生長細(xì)胞所需的營養(yǎng)、酸堿度和水分含量等因素。葡萄糖半固體瓊脂
Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗用)HL培養(yǎng)基 葡萄糖銨培養(yǎng)基 營養(yǎng)半固體瓊脂(NSA) Rustigian氏尿素培養(yǎng)液。1%氯化鈉堿性蛋白胨水
預(yù)裝培養(yǎng)基的有效期是指由于技術(shù)和保質(zhì)問題而限定的使用時限。雖然預(yù)裝培養(yǎng)基在生產(chǎn)過程中基本上是消毒處理的,但是在使用過程中,仍然會存在著微生物和其他污染因素對培養(yǎng)基的影響。因此,即使保質(zhì)期未過,在使用之前也應(yīng)檢查其質(zhì)量,并確保其適用于實驗的要求。一般情況下,市售的預(yù)裝培養(yǎng)基的保質(zhì)期通常為6-12個月,但是這只是一個約定值,并不是通用值。在制造過程中,每個廠家都會考慮到不同的因素,如培養(yǎng)基成分、凝膠結(jié)構(gòu)、包裝方式和儲存條件等,保質(zhì)期因此也不一樣。因此,在購買預(yù)裝培養(yǎng)基時,我們應(yīng)該認(rèn)真查看其保質(zhì)期,以便判斷其可行性。1%氯化鈉堿性蛋白胨水
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