HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時,需要注意一點:新配的培養基在經過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時,溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。常見的細菌類培養基包括營養瓊脂培養基、大腸桿菌培養基、金黃色葡萄球菌培養基等等。TGY肉湯培養基
總體而言,所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源,但由于微生物營養類型復雜,不同微生物對營養物質的需求是不一樣的,因此首先要根據不同微生物的營養需求配制針對性強的培養基。自養型微生物能從簡單的無機物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質、核酸、維生素等復雜的有機物,因此培養自養型微生物的培養基完全可以(或應該)由簡單的無機物組成。例如,培養化能自養型的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxdans)的培養基組成見表3.9。在該培養基配制過程中并未專門加入其他碳源物質,而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。麥康凱肉湯培養基還可以根據所需生長的微生物類別,加入特定的營養物質,例如血清、血紅蛋白等等。
半組合培養基:指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。固體培養基:1.液體培養基:80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。2.固體培養基:一類配制成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。3.半固體培養基:指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態的培養基。4.脫水培養基:又稱預制干燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。
培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調pH至7.2-7.4,若pH值超過7.6或遠低于6.8,則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。培養中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制,可選用無血清培養基。微生物的供能方式會影響它對營養物質的利用,因此不同微生物需要不同成分的培養基。
合成培養基(synthetic medium) 由已知化學成分的營養物質組成的培養基。根據微生物對營養要求的不同,可完全由無機鹽或化合物組成,如:氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、維生素等,其組成成分已知,只要嚴格操作,各批次間質量可做到穩定一致。此培養基可用來檢測某種營養物或藥物對微生物代謝的影響。組織細胞培養液均屬合成培養基。合成培養基的成本較高,其價格相當于同類天然培養基的幾倍以至于幾十倍。只含幾種無機鹽的合成培養基,只適用于自養菌的培養,如培養亞硝化細菌、氧化硫桿菌等的培養基。有些培養基大部分成分為已知化學結構的營養物質,其中的個別或少數成分為未明化學成分的必須營養物,成為半合成培養基,如百日咳菌苗生產用的水解酪素培養基。培養基種類繁多,根據需求選擇適合的培養基對于成功的微生物培養至關重要。麥芽汁瓊脂基礎
培養基是細胞和微生物生長所需的基本營養物質和環境條件。TGY肉湯培養基
培養基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境。培養基種類很多,根據配制原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基;根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基;根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等;根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基等。培養基配成后一般需測試并調節pH,還須進行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養基由于富含營養物質,易被污染或變質。配好后不宜久置,現配現用。TGY肉湯培養基
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