天然培養基是指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養基,如血漿、血清、、雞胚浸出液等。組織培養技術建立早期,體外培養細胞都是利用天然培養基。但是由于天然培養基制作過程復雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養基所替代。普遍使用的天然培養基是血清,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質在培養某些特殊細胞也是必不可少。血清質量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數之內,取材過程應嚴格按照操作規程執行,制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。細菌類培養基則包括馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基、麥芽瓊脂培養基等等。Littman瓊脂基礎
長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時,常需在培養基中加入少量螯合劑,避免培養基中產生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養基pH會發生改變(一般使pH降低),可根據所培養微生物的要求,在培養基滅菌前后加以調整。酵母氨基酸缺陷型合成液體培養基組氨酸缺陷/SC-His為了避免細胞爆破釋放DNA和蛋白質,培養基中常常添加DNA酶和蛋白酶等酶類。
動物細胞培養必需的溶液,平衡鹽水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎溶液。PH調整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羥乙基哌嗪乙烷磺酸)細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素,每毫升培養液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素:終濃度為50ug/ml培養液。3)制霉菌素:濃度25U/ml,小瓶分裝,每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清,前者來源少,價格高;后者要求剛產下尚未哺乳的小牛,因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質、氨基酸、葡萄糖等。蛋白質主要是白蛋白和球蛋白。
通常用心、腦或其他臟器浸液配制厭氧菌培養基,并常需加入硫乙醇酸鈉、半胱氨酸、肉渣、還原鐵、活性炭等還原劑或除氧材料。在液體培養基中還可加入刃天青或亞甲基藍作為氧化還原指示劑,以觀察培養基的含氧程度。心、腦浸液、肝塊、肉渣中含有不飽和脂肪酸,能吸收培養基中的氧。硫乙醇酸鈉、半胱氨酸是較強的還原劑,能消耗溶解在培養基中的氧。干燥的活性炭和脫脂棉同樣能吸收培養基中的氧。所以培養基中加入還原劑和吸收材料,目的都是為造成培養基的缺氧環境,使培養基保持較低的氧化還原電勢。此外,還可在培養基表面加一層液體石蠟,以隔絕培養基與大氣的接觸。培養基類型和配方可以根據需要進行定制,以滿足特定的實驗需求。
細菌培養基之面粉瓊脂培養基:面粉60g,瓊脂20g,水1000ml把面粉用水調成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調勻,補充水分,調整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。微藻培養基,BG-11培養基:NaNO3 1.5g,K2HPO4 ·3H2O0.04g,MgSO4·7H2O0.075g,CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid (檸檬酸)0.006g,Ferric ammonium citrate(檸檬酸鐵銨0.006g,EDTA (dinatrium-salt) 0.001g,Na2CO3 0.02g,A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸餾水)919ml。
培養基的配方也會受到環境、藥物和其他外部壓力的影響,因此,在實際應用中需要不斷進行調整和改進。DG18瓊脂基礎 GB
酵母培養基通常包含酵母營養素、碳水化合物和氮源。Littman瓊脂基礎
培養基的分類有幾種呢?按培養基組成物質的化學成分區分:1.天然培養基,天然培養基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養基。例如。牛肉膏蛋白胨培養基、麥芽汁培養基和LB培養基等。2.組合培養基,合成培養基是根據天然培養基的成分,用化學物質模擬合成、人工設計而配制的培養基。例如。高氏1號培養基和查氏培養基等。3.半組合培養基 ,指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。Littman瓊脂基礎
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