長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時,常需在培養基中加入少量螯合劑,避免培養基中產生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養基pH會發生改變(一般使pH降低),可根據所培養微生物的要求,在培養基滅菌前后加以調整。特定的培養基可用于特定的微生物和組織細胞培養。大腸菌群顯色培養基
半組合培養基:指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。固體培養基:1.液體培養基:80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。2.固體培養基:一類配制成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。3.半固體培養基:指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態的培養基。4.脫水培養基:又稱預制干燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。1%氯化鈉堿性蛋白胨水含血清培養基是一種以動物血清為主的培養基普遍用于誘導細胞分化和胚胎發育研究等方面。
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時,需要注意一點:新配的培養基在經過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時,溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。
細菌培養基之牛肉膏瓊脂培養基:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,氯化鈉0.5g,瓊脂1.5g,水100ml在燒杯內加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號后,放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到7.2-7.6,分裝在各個試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌:1.05千克每平方厘米、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養基:取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細細剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號,煮沸,轉用文火燉2小時。過濾,濾出的肉末干燥處理,濾液pH值調到7.5左右。每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,備用。酵母培養基通常包含酵母營養素、碳水化合物和氮源。
培養基的種類有哪些?鑒別培養基:利用細菌分解糖類和蛋白質的能力及其代謝產物的不同,在培養基中加入特定的作用底物和指示劑,觀察細菌生長過程中分解底物所釋放的不同產物,通過指示劑的反應不同來鑒別細菌。例如糖發酵管、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、伊紅-亞甲藍瓊脂和動力-吲哚-尿素(MIU)培養基等。選擇培養基:在培養基中加入抑制劑,去抑制標本中的雜菌生長,有助于所選擇的細菌種類的生長。例如培養腸道致病菌的SS瓊脂,其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌,枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌,因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。常見的培養基包括LB培養基、TSB培養基等。N6培養基(不含瓊脂)
培養基可以分為有機培養基和無機培養基兩類。大腸菌群顯色培養基
培養基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境。培養基種類很多,根據配制原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基;根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基;根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等;根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基等。培養基配成后一般需測試并調節pH,還須進行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養基由于富含營養物質,易被污染或變質。配好后不宜久置,現配現用。大腸菌群顯色培養基
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